[發明專利]金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C203及其篩選方法和應用

有效

• 申請號: 201611170849.9
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106636105B
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 王開宇;蘭小鵬;廖劍;洪笑遷;閆慧慧;楊湘越
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區福州總醫院
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;A61K31/7088;A61P31/04;C07K14/31;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 傅崇安

本發明涉及一種金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C203及其篩選方法和應用，所述核酸適配體C203的序列為：AGGGCCGAGCTCACTTGTCAGGTCGCCTCTTGCGCGGCGCACGGGCGGAAACGCCGCCGGCACAATTGTGC；它的篩選方法為：基于核酸適配體的體外SELEX篩選技術，利用羧基磁珠作為固相介質，以金黃色葡萄球菌腸毒素C2為靶標，通過金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠從ssDNA文庫中篩選得到與金黃色葡萄球菌腸毒素C2特異性結合的核酸適配體；本發明的核酸適配體C203能高親和力、高特異性地與金黃色葡萄球菌腸毒素C2結合。

技術領域

本發明涉及一種金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C203及其篩選方法和應用。

背景技術

金黃色葡萄球菌腸毒素是由金黃色葡萄球菌分泌的具有超抗原活性的外毒素。金黃色葡萄球菌腸毒素可不經抗原提呈細胞加工，直接與MHCⅡ類分子非限制性的結合，形成的復合物與T淋巴細胞抗原受體的β鏈V區結合，大量激活T淋巴細胞，使其活化、增殖，并釋放大量的炎性細胞因子引起強烈的免疫應答，最終導致炎癥失控和多器官的損害，引起毒素休克等疾病。此外，由于金黃色葡萄球菌腸毒素較能抗消化，耐熱以及只需很小劑量就可引發T細胞應答，金黃色葡萄球菌腸毒素也被作為腫瘤治療的超抗原藥物。

金黃色葡萄球菌腸毒素有多個血清型，分別是A型、B型、C1型、C2型、C3型、D型、E型、G型、H型、I型、M型、N型、O型和毒性休克綜合癥1型毒素、毒性休克綜合癥2型毒素等，其中金黃色葡萄球菌腸毒素C2不僅與金黃色葡萄球菌相關感染有關，同時也是金黃色葡萄球菌腸毒素中應用最多的超抗原藥物。

檢測金黃色葡萄球菌腸毒素C2主要采用免疫學方法，包括沉淀反應、凝集反應、ELISA、固相RIA、生物傳感器等，這些方法使用抗體作為金黃色葡萄球菌腸毒素C2檢測的識別元件，而抗體的制備存在周期長，步驟繁瑣，成本高等不足之處。近年來，以檢測金黃色葡萄球菌腸毒素C2基因為目標的分子生物學方法發展較快，但PCR等分子生物學方法仍存在假陽性、假陰性等技術難題。因此，研制具有更高靈敏度、經濟、簡便的金黃色葡萄球菌腸毒素C2檢測新技術，對于食品衛生監督、臨床金黃色葡萄球菌感染的診療等都有重要意義。

治療金黃色葡萄球菌腸毒素C2引起的毒素休克，臨床常采用抗炎、補液等對癥支持療法。最新研究發現，抑制金黃色葡萄球菌腸毒素C2的超抗原活性，在初始階段阻斷炎癥級聯反應的發生，是治療金黃色葡萄球菌腸毒素C2相關疾病的有效策略。基于此策略，研制各種多肽藥物、抗體藥物、疫苗等，已成為的金黃色葡萄球菌腸毒素C2生物技術新藥研究的熱點。

金黃色葡萄球菌腸毒素C2超抗原藥物的獲得，常采用基因克隆的方法，將金黃色葡萄球菌腸毒素C2基因片段克隆至原核表達載體中，在大腸桿菌中表達并純化。但這種方法中純化步驟常采用離子交換方法或帶標簽的親和純化方法，前者吸附選擇特異性差，后者試劑成本較高。

適配體又被稱為“合成抗體”、“化學抗體”，其化學本質是一條單鏈寡核酸分子(ssDNA或RNA)折疊成特定三維結構與靶物質高親和力和高特異性結合。適配體的獲得通過指數富集配體的系統進化技術(Systematic evolution of ligands byexponentialenrichment,SELEX)的體外篩選過程。核酸適配體具有高親和力、高特異性、可體外合成、可通過修飾改變其功能及藥代動力學特性、無免疫原性、經濟等特點。基于上述優勢開發的核酸適配體藥物可特異性阻斷靶標功能；將核酸適配體作為識別元件，還可開發簡便、精準的檢測新技術以及高效、經濟的親和純化系統。因此，篩選出高特異性、高親和力結合金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體具有重要的科研、臨床和市場價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種具有高特異性和高親和力的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C203及其篩選方法和應用。

本發明的目的通過如下技術方案實現：一種金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C203，它的序列如下：