[發(fā)明專利]高效液相色譜法快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201611164303.2
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN108204940A
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 洪霞;杜霞;劉靜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10;G01N30/02;G01N30/06
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本發(fā)明公開了一種采用高效液相色譜法快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度的方法，包括以下步驟：1)獲得多份不同已知濃度的金黃色葡萄球菌溶液；2)按以下色譜條件確定金黃色葡萄球菌與2，5?二羥基苯甲酸在高效液相色譜儀上響應(yīng)值的依從關(guān)系為線性關(guān)系，其中色譜柱：C18色譜柱；流動相：由體積比為10~20∶90~80的A液和B液組成，其中A液為乙腈，B液為0.03~0.07%體積的磷酸水溶液，洗脫時為等度洗脫；檢測波長：205~235nm；3)將待測水體樣品進(jìn)樣，將響應(yīng)的2，5?二羥基苯甲酸濃度值利用已有的線性關(guān)系曲線，讀出待測水體的金黃色葡萄球菌濃度。本發(fā)明所述方法操作簡單，檢測僅需3小時；檢測限可達(dá)10000cfu/mL。

技術(shù)領(lǐng)域

一種采用高效液相色譜法快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度的方法。

背景技術(shù).

金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)，有嗜肉菌的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。而對于金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量，衛(wèi)生部于2011年11月24日公布食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《速凍面米制品》，允許金葡菌限量存在。

目前，對速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度檢測的主要有顯微直接計數(shù)法、平板稀釋法、MPN法、血球板計數(shù)法、濁度法等，這些方法也是國內(nèi)外大多數(shù)檢測機(jī)構(gòu)使用的方法。但這些常規(guī)檢測方法或多或少存在著檢測周期長、程序復(fù)雜、所需試劑繁多以及檢測靈敏度不高等不足。如平板計數(shù)法要對未知樣品連續(xù)做3～4次10倍稀釋，才能得到合適的平板菌落數(shù)，每個樣品需做6～8個平板，當(dāng)樣品數(shù)很多時，檢測工作量相當(dāng)大，而且需要48h才能獲得結(jié)果。

金黃色葡萄球菌是一種兼性菌，無論氧氣存在與否，都能存活。在金黃色葡萄球菌代謝過程中，當(dāng)有空氣氧存在的時候，氧分子被金黃色葡萄球菌釋放的物質(zhì)還原并轉(zhuǎn)變成羥基自由基。如果在培養(yǎng)液中加入水楊酸，羥基自由基將水楊酸氧化成多元酚化合物(主要為2，5-二羥基苯甲酸，2，5-dihydroxybenzoic acid(2，5-DHBA)，且產(chǎn)生的多元酚化合物的量與金黃色葡萄球菌數(shù)量成正比關(guān)系(納米電極的制備及其在快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌的電分析化學(xué)研究，2006屆研究后碩士學(xué)位論文)。因此只要多酚化合物能夠得以檢測，則可以實現(xiàn)對金黃色葡萄球菌的快速檢測。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種采用高效液相色譜法快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度的方法。該方法操作簡單，檢測周期短，檢測靈敏度高。

本發(fā)明基于金黃色葡萄球菌在含水楊酸的培養(yǎng)液中代謝時能夠產(chǎn)生多元酚(主要為2，5-二羥基苯甲酸)，且產(chǎn)生多元酚的含量與金黃色葡萄球菌的計數(shù)呈正比的關(guān)系，利用高效液相色譜法檢測經(jīng)培養(yǎng)后的菌液中的2，5-二羥基苯甲酸含量，根據(jù)2，5-二羥基苯甲酸含量與金黃色葡萄球菌數(shù)量變化的對應(yīng)關(guān)系，從而實現(xiàn)對速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度的檢測。

發(fā)明內(nèi)容

一種采用高效液相色譜法快速檢測速凍食品中金黃色葡萄球菌濃度的方法，包括以下步驟：

1)獲得多份不同已知濃度的金黃色葡萄球菌溶液；

2)確定金黃色葡萄球菌與高效液相色譜方法的依從關(guān)系

2.1)確定高效液相色譜條件：

色譜柱：C18色譜柱 ；

流動相：由體積比為10～20：90～80的A液和B液組成，其中A液為乙腈，B液為0.03～0.07%體積的磷酸水溶液，洗脫時為等度洗脫；

檢測波長：205～235nm；

2.2)確定金黃色葡萄球菌與2，5-二羥基苯甲酸在高效液相色譜儀上響應(yīng)值的依從關(guān)系：