[發明專利]一種自然粒度下土壤氮分級方法

有效

• 申請號: 201611160091.0
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106596536B
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 張洋;謝德體;倪九派
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 李海華

1.一種自然粒度下土壤氮分級方法，其特征在于：本方法先采集新鮮的土樣樣品，然后用化學提取劑逐級提取，即利用不同的化學試劑對自然粒度下土壤樣品中氮的賦存形態進行提取，具體步驟如下：

1）采用去離子水提取土壤樣品中游離態氮FN，包括游離態總氮FTN、可溶性總氮DTN、游離態氨氮F-NH₄⁺、游離態硝氮F-NO₃^-、游離態顆粒氮FPN及可溶性有機氮DON；

2）在步驟1）提取后的土壤樣品中再采用氯化鉀KCl提取土壤樣品中離子交換態氮IEN，包括離子交換態總氮IETN、離子交換態氨氮IE-NH₄⁺、離子交換態硝氮IE-NO₃^-、離子交換態有機氮IEON；

3）在步驟2）提取后的土壤樣品中再采用醋酸鈉-醋酸緩沖液和氫氧化鈉NaOH分別提取土壤樣品中碳酸鹽結合態氮CN和鐵錳氧化態氮IMON；

4）在步驟3）提取后的土壤樣品中再采用鹽酸HCl提取土壤樣品中的酸解態氮HN，包括酸解總氮HTN、酸解銨態氮AN、酸解氨基酸態氮AAN、酸解氨基糖態氮ASN和酸解未知態氮UAN；

5）在步驟4）提取后的土壤樣品中用堿性過硫酸鉀消解-紫外分光光度計法測定殘留態氮RN；

所述各步驟具體為，

（1）稱取新鮮土樣6.0-8.0g作為土壤樣品，置于100ml離心管中，加入50ml去離子水，在300r、20-25℃下振蕩2h，然后在3500 r/min下離心8min，形成上清液A；吸取上清液A 5-10ml,采用堿性過硫酸鉀氧化-紫外分光光度法測定游離態總氮FTN；剩余上清液A用0.45um的濾膜抽濾，形成濾液B；分別吸取濾液B三份，每份 5-10ml，其中一份采用納氏試劑比色法測定可溶性總氮DTN；另一份采用納氏試劑比色法測定游離態氨氮F-NH₄⁺；第三份采用紫外分光光度法測定游離態硝氮F-NO₃^-；游離態顆粒氮FPN和可溶性有機氮DON 則采用差減法求得，即FPN=FTN－DTN，DON=DTN－（F-NH₄⁺＋F-NO₃^-）；

(2) 向上述步驟（1）離心后的土壤殘渣加入50ml 2mol L^-1的氯化鉀KCl溶液，在300r、20-25℃下振蕩3h，然后在3500 r/min下離心8min，形成上清液B；分別吸取上清液B 三份，每份10-15ml，其中一份采用堿性過硫酸鉀氧化-紫外分光光度法測定離子交換態總氮IETN；另一份采用納氏試劑比色法測定離子交換態氨氮IE-NH₄⁺；第三份采用紫外分光光度法測定離子交換態硝氮IE-NO₃^-；離子交換態有機氮IEON則采用差減法求得，即IEON=IETN－（IE-NH₄⁺＋IE-NO₃^-）；

（3）將步驟（2）KCl浸提后的土壤殘渣用飽和NaCl溶液清洗兩次后，加入50ml 0.5mol L^-1且pH=5的醋酸鈉-醋酸緩沖液，在300r、20-25℃下振蕩6h，然后在3500 r/min下離心8min，形成上清液C，用0.5mol L^-1 NaOH調節上清液C至pH=6.5后定容至100ml，吸取20-30ml定容液用堿性過硫酸鉀氧化-紫外分光光度法測定碳酸鹽結合態氮CN；

（4）經步驟（3）醋酸鈉-醋酸緩沖液浸提后的土壤殘渣用飽和NaCl溶液清洗兩次后，加入50ml 0.1mol L^-1 NaOH，在300r、20-25℃下振蕩17h，然后在3500 r/min下離心10min，形成上清液D；吸取上清液D 10-15ml采用堿性過硫酸鉀氧化-紫外分光光度計法測定鐵錳氧化態氮IMON；

（5）將步驟（4）浸提后的土壤殘渣用飽和NaCl溶液清洗兩次后，加入25ml 6mol L^-1的鹽酸溶液，在300r、20-25℃下振蕩3h后，轉移至50ml耐高溫比色管中，在120℃高壓鍋密封酸解12-24h，冷卻后轉移至100ml離心管中，在3500 r/min下離心10min，得上清液E；上清液E倒入燒杯中，用1mol L^-1 NaOH調至pH=6.5，并定容至100ml后，過濾，形成待測液E；吸取待測液E四份，每份 10-15ml，其中一份采用堿性過硫酸鉀氧化-紫外分光光度計法測定酸解總氮HTN；第二份采用納氏試劑比色法測定酸解銨態氮AN；第三份采用茚三酮比色法測定酸解氨基酸態氮AAN；第四份采用Elson-Morgen法測定酸解氨基糖態氮ASN；酸解未知態氮UAN則采用差減法求得，即：UAN=HTN－(AN＋AAN＋ASN)；

（6）將步驟（5）酸解后的土壤殘渣用飽和NaCl溶液清洗兩次后，加入25ml 4%堿性過硫酸鉀溶液，在300r、20-25℃下振蕩3h，然后轉移至50ml耐高溫比色管中于120℃消煮1h，冷卻至室溫后定容至50ml，將定容液過濾后濾液采用紫外分光光度法測定殘留態氮RN。