[發明專利]一種多肽納米微球、制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用

在審

• 申請號: 201611159286.3
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106729621A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 林秀坤;許煥麗;劉曉卉
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61K9/16;A61K47/44;A61P35/00
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司11429
• 代理人: 許振強

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，特別是涉及一種多肽納米微球、制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

多肽在生命過程中具有關鍵作用，多肽藥物是發展最快的領域之一，隨著多肽合成技術及多肽重組表達技術的發展，越來越多的多肽藥物應用于臨床治療。多肽藥物具有制備方便、活性強、容易修飾、不易產生耐藥性等優點，但也存在體內容易降解、半衰期短等問題。此外，許多大分子多肽具有良好的抑瘤作用，但由于其難于進入細胞發揮作用，無法作為抗腫瘤藥物應用，限制了這類藥物的應用。因此，迫切需要采用新的技術提高多肽穿透細胞膜/核膜的能力，提高這類藥物的血漿半衰期，這一技術的突破對發展多肽/蛋白藥物具有重要價值。

海鞘多肽CS5931是我們研究團隊由海洋生物海鞘中獲得的抗腫瘤多肽，前期研究表明，CS5931由58個氨基酸組成，分子量5931Da，可以通過線粒體途徑誘導多種腫瘤細胞凋亡，對肝癌、結腸癌及肺癌等都具有很強的殺傷活性，對小鼠肝癌和人結腸癌裸鼠移植性腫瘤的抑瘤率分別達到59%和70%。CS5931具有發展成為新型抗腫瘤藥物的潛力。但我們前期研究發現CS5931可以主要作用于腫瘤細胞膜表面的烯醇式酶1（Enolase1），能進入細胞內的量很少。但多肽作為藥物應用，極易受到體內蛋白酶的攻擊而降解，多數多肽的半衰期僅為十至幾十分鐘。我們測定了CS5931的半衰期，發現其在兔體內的血漿半衰期僅為22min。因此，增加多肽的半衰期對進一步提高其抗腫瘤效果具有重要意義。

納米技術是近年來發展最快的領域之一，在生物科學的研究方面，納米技術也獲得了廣泛應用，包括新型納米藥物的研發、納米醫用材料的應用都取得了突破性進展。本發明將多肽CS5931制備為納米微球，可大大提高其抗腫瘤活性。

發明內容

本發明的目的是提供了一種多肽CS5931納米微球，并提供了該納米微球的制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種多肽納米微球，其特征在于：包括納米載體和由載體包裹或吸附的多肽CS5931。

優選的，所述多肽CS5931由58個氨基酸組成，分子量5931Da，N末端序列為：MVVPCDGQSECPDGNT。

優選的，所述納米載體為植物油或十二烷制備的納米顆粒，所述植物油包括大豆油，橄欖油或其它可食用非調和油。

更優選的，所述納米載體與多肽CS5931的體積重量比為10：1-3ml/g。

更進一步的，所述的多肽微球的制備方法，包括以下步驟：將多肽CS5931溶于5-15倍體積蒸餾水制備為水溶液，加入植物油或十二烷，將超聲探頭置于水油液面分界處，超聲處理制備成納米微球，采用超濾膜分離納米微球，即得。

優選的，所述的多肽納米微球的制備方法，其特征在于包括以下步驟：將多肽CS5931溶于10倍體積蒸餾水制備為多肽水溶液，多肽水溶液按體積比3:2加入植物油或十二烷，將超聲探頭置于水油液面分界處，反應溫度為20℃，超聲強度為150W/cm²，超聲時間為3min，采用超濾膜分離納米微球，收集微球體積小于200納米的微球，即得。

本發明還提供了上述的多肽納米微球在抗腫瘤治療藥物中的應用。

相對于現有技術，本發明具有以下有益效果：

1）多肽CS5931具有一定的抗腫瘤活性，但其穩定性差，同時不能直接進入細胞發揮抗腫瘤作用；本發明將多肽CS5931制備成穩定的納米微球，其穩定性顯著增強，在室溫（25℃）條件下保存一周而不降解。這很好地解決了多肽的保存問題，為多肽藥物的應用開辟了新的途徑。

2）本發明將具有顯著抗腫瘤活性的多肽CS5931制備為多肽納米微球，經MTT法檢測，該納米微球具有更高的抗腫瘤活性，其半數抑制濃度（IC₅₀）約為多肽CS5931的十分之一，抗腫瘤活性顯著增強。

附圖說明

下面結合附圖對本發明進一步說明。

附圖1為本發明的多肽CS5931納米微球用戊二醛固定后的電鏡掃描圖。

附圖2為本發明的多肽CS5931納米微球的甲醛變性PAGE凝膠電泳圖，圖中，M：蛋白Marker；1：Cs5931凝膠電泳；2：Cs5931納米微球凝膠電泳。

附圖3為本發明的多肽CS5931納米微球對結腸癌HCT116和肝癌Bel7402細胞增殖作用圖；

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進一步說明。