[發(fā)明專利]硫氰酸鈉的免疫膠體金檢測卡及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611158307.X
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN108226505A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜道林;洪霞;袁超
• 申請（專利權(quán)）人: 南京億特生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明硫氰酸鈉的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，涉及動物源食品獸藥殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的檢測卡外殼中的試紙條，由PVC膠板、樣品墊、膠體金結(jié)合墊、包被膜和吸水墊組成；膠體金膜為含硫氰酸鈉單克隆抗體的玻璃纖維素膜，包被膜是硝酸纖維素膜，其上設(shè)有T線和C線，T線包被有硫氰酸鈉蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，C線包被有羊抗鼠IgG抗體。本發(fā)明有效用于快速檢測硫氰酸鈉，方便、快捷、結(jié)果準確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乳制品中硫氰酸鈉殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及硫氰酸鈉的免疫膠體金檢測卡及其制備方法。

背景技術(shù)

硫氰酸鈉（NaSCN）是生乳中天然存在的一種活性抗菌體系，其乳過氧化

物酶體系（LPS)可以抑菌保鮮。1991年，WHO和FAO的食品法典委員會公布的CAC/GL 13-1991《乳過氧化物酶體系用于原料乳的保鮮指南》中，硫氰酸鈉作為LPS的活化劑被允許添加到牛奶中；我國也于隨后頒布標準，允許將其添加到無冷鏈運輸體系中用于原料乳保鮮，添加量為15mg/L。

但硫氰酸鈉屬有毒有害物質(zhì)，其主要毒性作用為以抑制細胞色素氧化酶活性為主的急性毒性與以抑制碘轉(zhuǎn)運及甲狀腺素合成的慢性毒性，尤其對胎兒和嬰兒的腦部與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育存在較大的危害。隨著社會對食品安全重視度提高及原奶冷鏈運輸?shù)耐晟疲瑖覐U除了之前的標準并于2008年12月公布《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批）》，規(guī)定乳及乳制品中硫氰酸鈉屬違法添加物質(zhì)。目前，我國尚未制定檢測牛奶中硫氰酸鈉的標準及限值。Ft%HWGE

現(xiàn)有技術(shù)對于硫氰酸鈉的檢測主要是氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜法等檢測方法，但這些技術(shù)的缺陷明顯：設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、難以推廣。所以，建立一種簡單、有效、適合基層使用的測定方法是極其必要的。本發(fā)明的目的是研制一種更適合企業(yè)進行現(xiàn)場檢測且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上情況，本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種硫氰酸鈉的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡便地檢測出硫氰酸鈉的問題。

本發(fā)明的硫氰酸鈉膠體金檢測卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標記物的膠體金結(jié)合墊、包被了硫氰酸鈉-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結(jié)合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。

本發(fā)明的硫氰酸鈉膠體金檢測卡的制備方法，是由以下步驟實現(xiàn)：

(1)膠體金溶液制備：取1 L 三角燒瓶1個，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變?yōu)橥该鞯淖霞t色時，維持5 min后停止加熱，補水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)抗體的預(yù)處理：將要標記的硫氰酸鈉抗體在1000 r/min, 4℃條件下，離心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過0.22μm濾膜；