[發(fā)明專利]氟喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星的免疫膠體金檢測卡制備

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• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN108226500A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜道林;薛永來;洪霞
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明環(huán)丙沙星的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，涉及動(dòng)物源食品獸藥殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的檢測卡外殼中的試紙條，由PVC膠板、樣品墊、膠體金結(jié)合墊、包被膜和吸水墊組成；膠體金膜為含環(huán)丙沙星單克隆抗體的玻璃纖維素膜，包被膜是硝酸纖維素膜，其上設(shè)有T線和C線，T線包被有環(huán)丙沙星蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，C線包被有羊抗鼠IgG抗體。本發(fā)明有效用于快速檢測環(huán)丙沙星，方便、快捷、結(jié)果準(zhǔn)確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及谷物食品中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及環(huán)丙沙星的免疫膠體金檢測卡及其制備方法。

背景技術(shù)

喹諾酮類藥物（4-quinolones），又稱吡酮酸類或吡啶酮酸類，是一類較新的合成抗菌藥。這類藥物抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)、口服吸收好，組織濃度高，與其他抗菌藥物無交叉耐藥性，不良反應(yīng)相對較少等特點(diǎn)，已經(jīng)成為治療細(xì)菌感染性疾病的主要藥物。但目前也存在濫用該類藥物的趨勢。

喹諾酮類和其他抗菌藥的作用點(diǎn)不同，它們以細(xì)菌的脫氧核糖核酸（DNA）為靶。細(xì)菌的雙股DNA扭曲成為袢狀或螺旋狀（稱為超螺旋），使DNA形成超螺旋的酶稱為DNA回旋酶，喹諾酮類妨礙此種酶，進(jìn)一步造成細(xì)菌DNA的不可逆損害，而使細(xì)菌細(xì)胞不再分裂。它們對細(xì)菌顯示選擇性毒性。當(dāng)前，一些細(xì)菌對許多抗生素的耐藥性可因質(zhì)粒傳導(dǎo)而廣泛傳布。本類藥物則不受質(zhì)粒傳導(dǎo)耐藥性的影響，因此，本類藥物與許多抗菌藥物間無交叉耐藥性。

喹諾酮類藥物分為四代，目前臨床應(yīng)用較多的為第三代，常用藥物有諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氟羅沙星等。此類藥物對多種革蘭陰性菌有殺菌作用，廣泛用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病、胃腸疾病，以及呼吸道、皮膚組織的革蘭陰性細(xì)菌感染的治療。喹諾酮類抗生素是一類人畜通用的藥物。因其具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性和毒副作用小等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于畜牧、水產(chǎn)等養(yǎng)殖業(yè)中，包括在雞、鴨、鵝、豬、牛、羊、魚、蝦、蟹等的養(yǎng)殖中用于疾病防治。

現(xiàn)有技術(shù)對于環(huán)丙沙星的檢測主要是氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜法等檢測方法，但這些技術(shù)的缺陷明顯：設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、難以推廣。所以，建立一種簡單、有效、適合基層使用的測定方法是極其必要的。本發(fā)明的目的是研制一種更適合企業(yè)進(jìn)行現(xiàn)場檢測且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上情況，本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種環(huán)丙沙星的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡便地檢測出環(huán)丙沙星的問題。

本發(fā)明的環(huán)丙沙星膠體金檢測卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金結(jié)合墊、包被了環(huán)丙沙星-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結(jié)合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。

本發(fā)明的環(huán)丙沙星膠體金檢測卡的制備方法，是由以下步驟實(shí)現(xiàn)：

(1)膠體金溶液制備：取1 L 三角燒瓶1個(gè)，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變?yōu)橥该鞯淖霞t色時(shí)，維持5 min后停止加熱，補(bǔ)水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)抗體的預(yù)處理：將要標(biāo)記的環(huán)丙沙星抗體在1000 r/min, 4℃條件下，離心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過0.22μm濾膜；