[發(fā)明專利]一種由亞洲蜈蚣藻制備卡拉膠寡糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611156183.1
• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN106755195B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李江
• 申請（專利權(quán)）人: 自然資源部第一海洋研究所
• 主分類號(hào): C12P19/14
• 分類號(hào): C12P19/14
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

本發(fā)明提供一種制備卡拉膠寡糖的方法，是將亞洲蜈蚣藻的勻漿液先用纖維素酶和高溫卡拉膠酶進(jìn)行酶解后，再通過活性炭柱中，分別以重蒸水和5?25％等不同體積分?jǐn)?shù)梯度的乙醇溶液洗脫，獲得卡拉膠寡糖。其中高溫卡拉膠酶的氨基酸序列為SEQ ID NO:1。本發(fā)明首次從蜈蚣藻中制備海藻寡糖；其次，本發(fā)明采用高溫卡拉膠酶結(jié)合復(fù)合纖維素酶的制備工藝，實(shí)現(xiàn)一步制備海藻寡糖的工藝，極大的提高了海藻寡糖的制備效率，采用該制備工藝，卡拉寡糖的得率可達(dá)蜈蚣藻干重的8％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于活性物質(zhì)制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種由亞洲蜈蚣藻制備卡拉膠寡糖的方法。

背景技術(shù)

海藻中的低分子糖類物質(zhì)都來源于天然資源，安全性高、功效特殊、公眾的可信性高，因此作為保健、醫(yī)用化妝添加、醫(yī)藥輔料、醫(yī)藥的特殊用途，其研究和推廣的速度快，應(yīng)用范圍廣，因此開發(fā)成功后，一旦在保健、醫(yī)用化妝品領(lǐng)域取得一席之地，其直接經(jīng)濟(jì)效益巨大。而且通過深加工，將突破大型海藻作為食品、化工等添加劑的限制，由產(chǎn)品的銷售帶動(dòng)海藻的養(yǎng)殖，并由此將間接帶動(dòng)藻類的養(yǎng)殖、增加養(yǎng)殖收益、改善養(yǎng)殖海域的生態(tài)環(huán)境。

然而海藻寡糖的制備一直是制約其應(yīng)用的瓶頸，制備卡拉膠寡糖的方法主要有三種：生物酶法、化學(xué)法及物理法。傳統(tǒng)的化學(xué)法和物理法的主要缺陷是反應(yīng)條件不易控制、產(chǎn)物聚合度很高且分布不均一，且產(chǎn)生的大量廢水易污染環(huán)境。生物酶法能明顯克服這些缺陷，具有反應(yīng)條件溫和易控制、底物專一性好等優(yōu)點(diǎn)，但現(xiàn)有的卡拉膠酶通常來源于常溫微生物，大部分為熱不穩(wěn)定酶，當(dāng)溫度高于50℃時(shí)就會(huì)迅速失活，嚴(yán)重限制了其在卡拉膠寡糖制備工藝中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決海藻寡糖傳統(tǒng)制備方法效率低下的問題，本發(fā)明提供一種制備卡拉膠寡糖的制備工藝，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明的方法包括以下步驟：

1)將亞洲蜈蚣藻沖洗干凈，切碎、勻漿配成3-5％(w/v)的勻漿液；

2)向蜈蚣藻的勻漿液中，加入纖維素酶，在55℃作用進(jìn)行酶解1-4h或以上；

作為優(yōu)選，按照質(zhì)量比1.0-3.5萬U/g的比例加入纖維素酶；

3)然后添加高溫卡拉膠酶，55℃，35rpm條件下酶解1-7h；

作為優(yōu)選，按照0.5-11.0U/g蜈蚣藻的量添加高溫卡拉膠酶；

4)酶解液經(jīng)離心、濃縮，稱取濃縮的酶解液，緩慢加入到活性炭柱中，分別以重蒸水和5-25％等不同體積分?jǐn)?shù)梯度的乙醇溶液洗脫，流速控制為3.0～4.0ml/min；收集各種洗脫液濃縮至適量，冷凍干燥，獲得卡拉膠寡糖。

所述的高溫卡拉膠酶的氨基酸序列為SEQ ID NO:1；

上述方法中使用的活性炭柱中的活性炭，是先用稀鹽酸浸泡后，再去掉稀鹽酸，用無水乙醇浸泡，再倒出無水乙醇加入蒸餾水浸泡，最后將活性炭烘干備用。

本發(fā)明首次從蜈蚣藻中制備海藻寡糖；其次，本發(fā)明采用高溫卡拉膠酶結(jié)合復(fù)合纖維素酶的制備工藝，實(shí)現(xiàn)一步制備海藻寡糖的工藝，極大的提高了海藻寡糖的制備效率，采用該制備工藝，卡拉寡糖的得率可達(dá)蜈蚣藻干重的8％。

附圖說明

圖1：熱穩(wěn)定卡拉膠酶基因重組表達(dá)的SDS-PAGE圖譜

圖2：熱穩(wěn)定卡拉膠酶的最適作用溫度圖；

圖3：酶解寡糖的層析檢測結(jié)果圖；其中注：M為標(biāo)準(zhǔn)寡糖對(duì)照；依次為酶活酶對(duì)照、15min、30min、60min、90min、120min、150min、180min、360min、720min、1440min。

圖4：纖維素酶的添加量對(duì)酶解效果的影響圖；

圖5：纖維素酶的作用時(shí)間對(duì)酶解效果的影響圖；