[發明專利]一種促進生物發酵合成安卓奎諾爾的方法

有效

• 申請號: 201611154163.0
• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號: CN106701841B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 曹書華
• 申請（專利權）人: 曹書華
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種促進生物發酵合成安卓奎諾爾的方法，屬于微生物發酵技術領域。本發明通過在一定的培養時間下往培養基中添加大豆卵磷脂或者還添加煙葉與甲羥戊酸，有效地提高了樟芝樟芝液態發酵產安卓奎諾爾的產量。

技術領域

本發明涉及一種促進生物發酵合成安卓奎諾爾的方法，屬于微生物發酵技術領域。

背景技術

樟芝(Antrodiacamphorata)又稱為牛樟芝、牛樟菇，是臺灣特有的一類十分珍稀的食藥兩用真菌。樟芝子實體和菌絲體中含有多糖類物質，三萜類物質，不飽和脂肪酸，泛醌類物質，馬來酸與琥珀酸衍生物等70多種生理活性物質，具有廣泛的藥理活性。

生理活性物質安卓奎諾爾(Antroquinonol)是2007年Lee等人利用正己烷從樟芝子實體或樟芝固體發酵粉末中萃取并鑒定一種新化合物，屬于泛醌類的衍生物。2010年Chiang等人研究表明Antroquinonol可以通過活化AMPK來抑制胞內蛋白質的合成途徑，進而抑制細胞周期，從而產生抗癌效果。2012年Tsai等研究發現Antroquinonol具有抗氧化應激和抗炎等活性。由于Antroquinonol具有顯著的抗癌活性，并且，它對于癌細胞與正常細胞具有選擇性，目前已進入FDA二期臨床實驗，是具有優良前景的抗癌化合物。

目前與樟芝中生理活性物質Antroquinonol相關的研究基本集中在成分、抑制癌細胞、抑制B型肝炎、護肝、自體免疫調節及抗疲勞等藥理活性及藥理機制，而對于其生物合成方面的研究非常欠缺，有關樟芝生物合成Antroquinonol的發酵調控及發酵水平的文獻報道極為有限。公開號為CN102356728A(一種提高樟芝活性產物產量的固態培養方法)的專利，該專利公開了利用固體培養基栽培樟芝獲得活性產物Antroquinonol，但由于該專利中的固態發酵培養方法過于耗時且成本較高，此外產物的發酵單位也比較低。也有研究通過樟芝深層液態發酵已經成功地實現了菌絲體的快速收集，樟芝液態發酵生產活性產物是一種十分有效的方法，故如何通過樟芝液態深層發酵來有效地提高Antroquinonol的產量將成為該領域的研究熱點。

樟芝發酵活性產物安卓奎諾爾，分子結構較為新穎，目前對其生物合成途徑仍然沒有深入研究，采用普通的液態發酵培養基成分，很難合成Antroquinonol。已有報道根據其分子結構的特點，通過實驗不斷探索培養基中的添加因子及其添加方式，研究了外源前體物質和效應物對樟芝液態發酵生物合成Antroquinonol的影響。有必要開發更多的通過廉價添加物提高發酵生產水平

發明內容

為了克服上述問題，本發明提供了一種促進生物發酵合成安卓奎諾爾的方法，通過在一定的培養時間下往培養基中添加大豆卵磷脂或者還添加煙葉與甲羥戊酸，有效地提高了樟芝樟芝液態發酵產安卓奎諾爾的產量。

在一種實施方式中，所述方法是接種樟芝(Antrodia camphorata)種子培養液于液態發酵基本培養基后，在22-34℃發酵6-8d；其中在發酵14-18h時向發酵培養液中加入終濃度為 1～5g/L的大豆卵磷脂。

在一種實施方式中，所述方法還包括在發酵32～36h時向發酵培養液中加入終濃度為5～8g/L的煙葉，在發酵50～54h時向發酵培養液中加入終濃度為40～60mg/L的甲羥戊酸。

在一種實施方式中，所述液態發酵基本培養基組成：葡萄糖10-100g/L，黃豆粉2-10g/L，玉米漿粉1-10g/L，硫酸鎂0.1-10g/L，磷酸二氫鉀0.1-10g/L。

在一種實施方式中，所述樟芝種子培養液的制備方法：利用一定量的無菌水從新鮮的樟芝菌斜面上洗下孢子，制備孢子懸浮液，以體積比5-15％接入裝有種子培養基中，于20-35℃，轉速50-250r/min培養1-10d，得到處于生長對數期的樟芝種子液。

在一種實施方式中，所述發酵是采用搖瓶發酵，轉速50-250r/min。