[發(fā)明專利]檢測三聚氰胺殘留的熒光微球免疫層析試紙條及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號: CN106771238B
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設計）人: 馮才偉;何方洋;萬宇平;馮靜;楊昌松;崔廷婷;崔彥虎;魏力杰
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種檢測三聚氰胺殘留的熒光微球免疫層析試紙條及其制備方法和應用。試紙條包括底板及在底板上依次搭接粘貼的樣品結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，樣品結合墊上包埋有熒光微球標記的抗三聚氰胺單克隆抗體，硝酸纖維素膜上固定有檢測區(qū)和質控區(qū)，檢測區(qū)噴涂有三聚氰胺半抗原?載體蛋白偶聯物，質控區(qū)噴涂有羊抗鼠抗抗體。本發(fā)明主要用于三聚氰胺殘留的檢測，具有靈敏度高、檢測快速、操作方便、經濟實用等優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明屬于食品安全中非法添加物檢測領域，具體涉及一種檢測樣品中三聚氰胺殘留的熒光微球免疫層析試紙條及其制備方法和應用。

技術背景

三聚氰胺簡稱三胺，化學名1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨，分子式為C₃N₆H₆，相對分子質量為126.12，是一種低毒無味的純白色單斜棱晶體，廣泛應用于涂料、建材、造紙、皮革、紡織等行業(yè)中。由于三聚氰胺的含氮量高達66％，是蛋白質平均含氮量的4倍，而常用的凱氏定氮法測定樣品中的蛋白質含量時卻不能區(qū)分這種非蛋白氮，因此被不法商販利用添加在飼料和食品中以提高食品和飼料中粗蛋白質檢測數值。動物實驗表明，三聚氰胺對于哺乳動物屬于微毒、低毒類化學物質，長期飼喂可能造成生殖、泌尿系統的損害，膀胱、腎部出現結石，并可進一步誘發(fā)膀胱癌。聯合國負責食品安全標準的機構國際食品法典委員會2010年7月6日表示，該委員會已就食品中三聚氰胺的允許含量設立了新標準。新標準規(guī)定，每千克嬰兒配方奶粉中的三聚氰胺含量不能超過1mg，而每千克其他食品或動物飼料中的三聚氰胺含量不能超過2.5mg。因此，加強對三聚氰胺檢測技術的研究和快速檢測技術的發(fā)展是非常有必要的。

目前，檢測三聚氰胺比較經典的方法有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜/質譜法(LC-MS/MS)、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)等，這些都是比較傳統的方法，也是目前的確證方法。另外，目前常用的還有酶聯免疫法(ELISA)。但由于以上方法均需先進檢測儀器，檢測費用昂貴、步驟繁瑣耗時，且對操作人員專業(yè)性要求較高，不適用于基層企事業(yè)單位的大通量快速篩查檢測。膠體金免疫層析法具有檢測速度快、價格便宜、操作簡單等優(yōu)點，是目前國內外檢測三聚氰胺的主要監(jiān)控方法，但仍存在一些缺陷，如穩(wěn)定性較差、靈敏度較低、無法實現定量檢測、基質效應明顯背景干擾大，且顏色單一，難以實現多檢和聯檢。

熒光微球免疫層析技術是繼膠體金免疫層析技術后，在熒光染料標記技術上發(fā)展起來的，作為一種免疫學檢測方法，它是免疫親和技術、免疫標記技術、免疫層析技術的結合，與膠體金免疫層析技術一樣具有快速、操作簡便等優(yōu)點。但是相比膠體金等傳統標記物，熒光微球的發(fā)光強度可以隨激發(fā)光的強度增強而增強，所以熒光微球標記有望提高免疫層析技術的檢測限；而在微球殼結構的作用下，熒光微球具有相對穩(wěn)定的形態(tài)結構，粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高、重復性好，有較好的生物相容性；且形成微球后染料熒光猝滅大大減少，發(fā)射強而穩(wěn)定，且基本不受外界環(huán)境介質變化的影響。因此相比上述檢測方法，熒光微球免疫層析技術同時具有檢測靈敏度高、操作簡便的優(yōu)點。

發(fā)明內容

本發(fā)明的一個目的是針對上述現有技術的缺陷，提供一種靈敏度高、操作簡便、檢測快速、價格低廉的檢測三聚氰胺殘留的熒光微球免疫層析試紙條；本發(fā)明的另一個目的是提供上述試紙條的制備方法；本發(fā)明的再一個目的是提供上述試紙條在檢測三聚氰胺中的應用。

為了實現上述目的，本發(fā)明采取的一個技術方案是：

提供一種檢測三聚氰胺殘留的熒光微球免疫層析試紙條，它包括底板及在底板上依次搭接粘貼的樣品結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述樣品結合墊上包埋有熒光微球標記的抗三聚氰胺單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上固定有檢測區(qū)和質控區(qū)，檢測區(qū)噴涂有三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物，質控區(qū)噴涂有羊抗鼠抗抗體。