[發(fā)明專(zhuān)利]一組驢源性特征肽及其在驢皮和阿膠膠定性檢測(cè)中的應(yīng)用流程

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611148596.5
• 申請(qǐng)日: 2016-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106589063B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石峰;陳曉;鞏麗萍;杭寶建;咸瑞卿;郭常川;王駿;劉艷明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/06
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/06;C07K7/08;G01N33/68
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333
• 代理人: 鄭學(xué)成

1.一組驢源性特征肽，其特征在于，包括五條驢源性特征肽，所述五條驢源性特征肽分別為驢源性特征肽1GPTGEPGKPGDK；驢源性特征肽2GATGPAGVR；驢源性特征肽3GEAGPQGAR；驢源性特征肽4GEIGNPGR；驢源性特征肽5GEIGNPGR，所述驢源性特征肽5中的P羥基化，所述驢源性特征肽1是驢相對(duì)于馬、牛、羊、豬所特有，驢源性特征肽2是驢相對(duì)于馬和豬所特有，驢源性特征肽3和驢源性4是驢相對(duì)于牛、羊、豬所特有，驢源性特征肽5是驢相對(duì)于牛、羊所特有。

2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的一組驢源性特征肽在驢皮鑒別方面中的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：將皮樣去毛、皮下脂肪及雜質(zhì)；

步驟二：采用胰蛋白酶酶解：稱(chēng)取皮類(lèi)樣品，利用丙酮進(jìn)行脫脂處理，加入超純水將皮溶解，冷凍干燥后稱(chēng)取1.5mg加入去離子水配成一定濃度的蛋白樣品，加入變性緩沖液，進(jìn)行超濾置換為碳酸氫氨緩沖液，加入胰蛋白酶37℃溫浴酶解，超濾管離心過(guò)濾收集濾液；

步驟三：進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)：采用的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1％甲酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫：0→5min，流動(dòng)相A為95％；5→8min，流動(dòng)相A為95％→92％；8→10min，流動(dòng)相A為92％→50％；10→12min，流動(dòng)相A為50％；12→12.1min，流動(dòng)相A為50％→95％；12.1→15min，流動(dòng)相A為95％,流速為0.3ml/min；

步驟四：采用電噴霧正離子模式進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以從驢皮、馬皮、牛皮、羊皮和豬皮中區(qū)分驢皮，如果五條特征肽全部檢出，則該皮樣為驢皮：驢源性特征肽1選擇m/z380.7→374.82,493.56；驢源性特征肽2選擇m/z393.24→384.42,499.3；驢源性特征肽3選擇m/z421.71→585.17,656.26；驢源性特征肽4選擇m/z400.26→500.2,613.27；驢源性特征肽5選擇m/z408.26→345.18,516.22；作為離子對(duì)進(jìn)行MRM掃描。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一組驢源性特征肽在驢皮鑒別方面中的應(yīng)用，其特征在于，步驟二中，所述變性緩沖液為0.5MTris-HCl，2.75mM乙二胺四乙酸，0.5M鹽酸胍，pH8.0的緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一組驢源性特征肽在驢皮鑒別方面中的應(yīng)用，其特征在于，步驟四中，所述電噴霧正離子模式以三重四極桿質(zhì)譜作為檢測(cè)器，所述其電噴霧離子源為ESI+。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的一組驢源性特征肽在阿膠鑒別方面中的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：采用胰蛋白酶酶解：稱(chēng)取0.2g膠類(lèi)樣品溶于100ml 1％碳酸氫氨緩沖液，加入胰蛋白酶37℃溫浴酶解；超濾管離心過(guò)濾收集濾液；

步驟二：進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)：采用的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1％甲酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫：0→5min，流動(dòng)相A為95％；5→8min，流動(dòng)相A為95％→92％；8→10min，流動(dòng)相A為92％→50％；10→12min，流動(dòng)相A為50％；12→12.1min，流動(dòng)相A為50％→95％；12.1→15min，流動(dòng)相A為95％,流速為0.3ml/min；

步驟三：采用電噴霧正離子模式進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以從阿膠、馬皮膠、牛皮膠、羊皮膠和豬皮膠中區(qū)分阿膠：如果五條特征肽全部檢出，則該樣品為阿膠：驢源性特征肽1選擇m/z380.7→374.82,493.56；驢源性特征肽2選擇m/z393.24→384.42,499.3；驢源性特征肽3選擇m/z421.71→585.17,656.26；驢源性特征肽4選擇m/z400.26→500.2,613.27；驢源性特征肽5選擇m/z408.26→345.18,516.22；作為離子對(duì)進(jìn)行MRM掃描。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一組驢源性特征肽在阿膠鑒別方面中的應(yīng)用，其特征在于，步驟三中，所述電噴霧正離子模式以三重四極桿質(zhì)譜作為檢測(cè)器，所述其電噴霧離子源為ESI+。