[發(fā)明專利]山羊角、綿羊角、水牛角、黃牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角藥材中摻偽的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611148592.7
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN106749599B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杭寶建;邢晟;由鵬飛;石峰;鞏麗萍;咸瑞卿;郭常川;王駿;劉艷明
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333
• 代理人: 鄭學成

1.一種山羊角、綿羊角、水牛角、黃牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角藥材中摻偽的檢測方法，能夠檢出羚羊角藥材中摻入的山羊角、綿羊角、水牛角、黃牛角成分，其特征在于,所述特征肽的序列為SQQQEPLVCPNYQSYFR；

所述檢測方法包括如下步驟：

步驟一：將角類樣品采用胰蛋白酶酶解處理：取角樣品粉末1mg，加1ml水超聲10min，10000rpm離心10min收集沉淀；加1ml 50％乙醇超聲10min，10000rpm離心10min收集沉淀；加入0.5ml變性緩沖液；加入25μl 1M DTT；90℃處理1h，加入60μl 1M IAA，暗處反應1h，10000rpm離心10min，收集上清；取100μl上清加入10kd超濾管，10000rpm離心20min；加入0.4ml 25mM NH₄HCO₃洗滌3次；加100μl 25mM NH₄HCO₃溶液到超濾管中，加入2μg胰蛋白酶；37℃反應16h；10000rpm離心10min收集濾液；

步驟二：進行液質(zhì)聯(lián)用分析：采用的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1％甲酸水溶液為流動相A，以乙腈為流動相B，梯度洗脫：0→3min，流動相A為96％；3→8min，流動相A為96％→92％；8→10min，流動相A為92％→50％；10→12min，流動相A為50％；12→12.1min，流動相A為50％→95％；12.1→15min，流動相A為96％，流速為0.3ml/min；

步驟三：采用電噴霧正離子模式進行多反應監(jiān)測，選擇離子對715.33→572.28，910.52進行MRM掃描。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中，所述變性緩沖液為6M鹽酸胍、1.2M Tris-HCl、2.5mM EDTA、pH8.4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟三中，所述電噴霧正離子模式以三重四極桿質(zhì)譜作為檢測器。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟三中，所述電噴霧離子源為ESI+。