[發(fā)明專利]聚多巴胺包覆的金納米棒材料及其制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611148517.0
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN106692995A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設計）人: 高明霞;孫長龍;張祥民
• 申請（專利權(quán)）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K49/22
• 分類號: A61K49/22;A61K41/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司31200
• 代理人: 陸飛,陸尤

1.一種聚多巴胺包覆的金納米棒材料的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）金納米種子的合成：在室溫下，將1-10mL濃度為0.5-1 mM的氯金酸溶液同1-10mL濃度為0.2-0.5 M 的CTAB溶液充分混勻，隨后加入0.5-1mL濃度為0.01-0.05 M的預冷的硼氫化鈉溶液，28-37℃避光反應2-5小時，得到棕色的金納米種子溶液；

（2）金納米棒的合成：將1-10mL濃度為1-2 mM的氯金酸溶液同1-10mL濃度為0.2-0.5M 的CTAB溶液充分混勻，加入0.1-0.5 mL濃度為5-20mM的硝酸銀溶液充分混勻，加入0.05-0.1 mL濃度為0.1-0.2 M的抗壞血酸溶液充分混勻，加入0.01-0.02 mL步驟（1）中合成的金納米種子溶液，充分混勻后28-37 ℃反應過夜，得到長寬比為3-5的金納米棒材料，8000-10000rpm離心，用水洗滌2-3遍；

（3）金納米棒表面聚多巴胺包覆：將洗滌后的金納米棒材料重溶于濃度為10-20mM，pH值為8.0-10.0的Tris緩沖溶液中，加入0.01-0.02 mL濃度為10-20 mM的對巰基苯硼酸溶液，震蕩反應1-2小時，隨后加入0.05-0.02mL濃度為1-2 mg/mL的多巴胺溶液，28-37℃震蕩反應過夜，得到聚多巴胺包覆的金納米棒材料；

（4）抗體的修飾：采用醌基共價偶聯(lián)的方法將上皮細胞粘附分子抗體修飾于金納米棒材料表面，將聚多巴胺包覆的金納米棒材料重溶于濃度為0.02-0.05 mM PBS緩沖溶液中，加入0.02-0.05 mL抗體溶液，25-37 ℃偶聯(lián)12-20 h，即將抗體修飾到金納米棒材料表面，可實現(xiàn)對腫瘤靶細胞的特異性標記。

2.由權(quán)利要求1所述制備方法得到的聚多巴胺包覆的金納米棒材料。

3.一種基于權(quán)利要求2所述的聚多巴胺包覆的金納米棒材料的腫瘤細胞拉曼成像檢測與實時光熱治療平臺，其特征在于，該平臺包括：

細胞培養(yǎng)基，用于孵育細胞；

抗體修飾的聚多巴胺包覆的金納米棒溶液，用于在近紅外激光的激發(fā)下，表面增強拉曼效應與光熱轉(zhuǎn)化效應，并用作腫瘤靶細胞特異性標記；

拉曼顯微鏡載物臺，用于放置細胞培養(yǎng)器皿；

裝備有近紅外激光的拉曼成像顯微鏡，其中，拉曼成像顯微鏡用于對細胞進行快速拉曼掃描，并利用對巰基苯硼酸的特征拉曼信號峰的信號強度進行成像，成像結(jié)果顯示腫瘤細胞的位置；近紅外激光用于照射腫瘤細胞，利用金納米棒的光熱轉(zhuǎn)化效應使材料升溫，壞死腫瘤細胞。

4.一種如權(quán)利要求3所述的基于聚多巴胺包覆的金納米棒材料的腫瘤細胞拉曼成像檢測與實時光熱治療平臺的操作方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）材料與細胞孵育：首先在玻底培養(yǎng)皿中加入約10⁵-10⁶/mL的細胞，用細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜，使細胞貼壁生長；取10-30 μL抗體修飾的聚多巴胺包覆的金納米棒溶液，加入培養(yǎng)皿中，37℃條件下輕微震蕩孵育1-2 h, 棄去上層培養(yǎng)基，用PBS洗滌三次后，并加入100 -200μL的PBS；

（2）腫瘤拉曼成像：將玻底培養(yǎng)皿放置于拉曼顯微鏡載物臺上，調(diào)整焦距使細胞可以清晰的顯現(xiàn)在視野中，選擇合適的激發(fā)光并調(diào)整相應的測試參數(shù)，利用拉曼顯微鏡點掃描的方法對細胞進行快速拉曼掃描，利用對巰基苯硼酸的特征拉曼信號峰的信號強度進行成像，成像結(jié)果顯示腫瘤細胞的位置；

（3）光熱殺傷：根據(jù)拉曼成像結(jié)果，將激光定點到腫瘤細胞表面，1-2分鐘/每個細胞，延長對靶細胞的激光照射時間，4-5分鐘/每個細胞，利用金納米棒的光熱轉(zhuǎn)化效應使材料升溫，進而引起細胞壞死，達到腫瘤細胞光熱殺傷的效果。