[發(fā)明專利]預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)TRAIL類似物敏感性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611147049.5
• 申請(qǐng)日: 2016-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106591449B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴兵;姬建新;翟祎星;鐘應(yīng)佳;黃迎春;楊莉;邢曄;陳嬌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都地奧九泓制藥廠
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886
• 代理公司: 成都弘毅天承知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51230
• 代理人: 楊保剛;晏輝

本發(fā)明公開(kāi)了一種預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)TRAIL類似物敏感性的方法，步驟如下：(1)以現(xiàn)有的腫瘤細(xì)胞株作為樣本庫(kù)，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定樣本庫(kù)中腫瘤細(xì)胞株的六種基因的mRNA表達(dá)水平，以Cq值表示；(2)在體外實(shí)驗(yàn)中測(cè)定樣本庫(kù)中腫瘤細(xì)胞株在不同濃度TRAIL類似物處理下的生存率，指示其對(duì)TRAIL類似物的敏感性；(3)以腫瘤細(xì)胞株中六種基因的Cq值為自變量，以TRAIL類似物處理下各腫瘤細(xì)胞株的生存率為因變量，通過(guò)多元線性回歸建模，篩選并建立最優(yōu)的多元線性方程；(4)提取患者腫瘤細(xì)胞，檢測(cè)該其中對(duì)應(yīng)基因的mRNA表達(dá)水平的Cq值，代入多元線性方程，通過(guò)計(jì)算預(yù)測(cè)該病人對(duì)該TRAIL類似物的敏感性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于新型生物藥研發(fā)領(lǐng)域，涉及篩選、檢測(cè)及分析相關(guān)因子的mRNA表達(dá)水平以預(yù)測(cè)檢測(cè)對(duì)象對(duì)TRAIL類似物的敏感性。

背景技術(shù)

DATR是由成都地奧制藥集團(tuán)有限公司自主發(fā)明的一種旨在提高人類腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)生物活性和穩(wěn)定性的新型突變體，即一種TRAIL類似物。它在已知的人類TRAIL基因全序列cDNA的基礎(chǔ)上，去除了N端編碼第1～113位及第119、第120位氨基酸的堿基序列，保留了C端氨基酸的堿基序列而獲得長(zhǎng)度為168個(gè)氨基酸的人類TRAIL缺失突變體(ZL專利號(hào)：01105946.X一種突變的人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體突變體多肽及其用途)。研究表明，DATR具有與野生型TRAIL完全相同的空間構(gòu)象，而其生物活性和穩(wěn)定性優(yōu)于野生型蛋白。

體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DATR對(duì)人類肺、肝、胃、結(jié)直腸、乳腺、血液及淋巴、前列腺、卵巢、神經(jīng)等9個(gè)系統(tǒng)的29株傳代腫瘤細(xì)胞均有不同程度的誘導(dǎo)凋亡作用，而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)顯著毒性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DATR對(duì)處于國(guó)內(nèi)腫瘤發(fā)病率前10位的肺癌(NCI-H460)、肝癌(SMMC-7721)、胃癌(MKN45)、結(jié)直腸癌(COLO205、HCT-8)、乳腺癌(MDA-MB-231)、及淋巴瘤(29SR)等多種人體腫瘤均具有較強(qiáng)的抗腫瘤作用。體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究表明，在相同劑量下，DATR的抗腫瘤效果優(yōu)于野生型TRAIL。

然而，與其他所有抗腫瘤藥物相似，DATR僅對(duì)部分腫瘤患者有較好的療效。因此，在對(duì)腫瘤患者用藥前，利用可靠的生物學(xué)指標(biāo)以預(yù)測(cè)該腫瘤對(duì)DATR是否敏感，對(duì)其臨床應(yīng)用具有重大意義。

目前已知在腫瘤細(xì)胞膜上TRAIL的受體有4種，即DR4，DR5，DcR1，DcR2；可溶性誘騙受體1種，即OPG(osteoprotegerin)(圖2,Almasan and Ashkenazi,2003)。其中，OPG僅與TRAIL有極弱的結(jié)合能力，其功能尚未報(bào)道。當(dāng)TRAIL與DR4或DR5結(jié)合，可誘導(dǎo)受體同型三聚化，招募FADD、CASP8或CASP10前體形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體(DISC)，進(jìn)而激活下游以Caspase為核心的凋亡信號(hào)通路以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡(圖3,Wiezorek et al.,2010)。而DcR1無(wú)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，DcR2僅有部分胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，雖然它們亦能與TRAIL結(jié)合，但不能激活上述凋亡信號(hào)通路。據(jù)報(bào)道，DcR2還能激活NF kappaB信號(hào)通路拮抗腫瘤細(xì)胞凋亡。c-FLIP作為上述凋亡信號(hào)通路的負(fù)向調(diào)控因子，因與CASP8擁有相似的結(jié)構(gòu)而被招募至DISC中阻礙CASP8后續(xù)結(jié)合及加工。由此可見(jiàn)，TRAIL在腫瘤細(xì)胞膜上受體、DISC組成及相關(guān)調(diào)控因子的表達(dá)量很可能與腫瘤對(duì)TRAIL類似物的敏感性密切相關(guān)。此外，已報(bào)道的可能與TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的相關(guān)因子亦值得關(guān)注，如HTATIP2。基于此，本發(fā)明提出利用上述相關(guān)因子的mRNA表達(dá)水平來(lái)預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)TRAIL類似物敏感性的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是建立了一種通過(guò)檢測(cè)相關(guān)因子的mRNA表達(dá)水平，通過(guò)計(jì)算分析來(lái)預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)TRAIL類似物敏感性的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種利用相關(guān)因子表達(dá)水平預(yù)測(cè)腫瘤對(duì)TRAIL類似物敏感性的方法，步驟如下：