[發明專利]一種益生菌及其制備方法

有效

• 申請號: 201611146623.5
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN107043714B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 彭永正;伍菲凡;郭先鳳;易江豐
• 申請（專利權）人: 廣州康澤醫療科技有限公司;南方醫科大學珠江醫院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，尤其涉及一種益生菌及其制備方法。

背景技術

益生菌，是一類對宿主有益的活性微生物，是定植于人體腸道、生殖系統內，能產生確切健康功效從而改善宿主微生態平衡、發揮有益作用的活性有益微生物的總稱。益生菌對宿主健康起著重要作用，主要包括以下幾個方面：一、幫助宿主對營養物質的消化吸收；二、產生維生素、短鏈脂肪酸及抗氧化劑等重要物質；三、通過抑制有害細菌的生長及清除有害細菌產生的毒素來幫助宿主抵御細菌病毒感染，提升宿主的抵抗力。

目前，人類發現的益生菌大體上可以分為三類：乳酸桿菌、雙歧桿菌和革蘭氏陽性菌球菌。隨著對腸道菌群的了解越來越深入，多數研究表明不同的細菌對不同的疾病人群發揮著不同的作用，提出了需要分離培養出多種化的益生菌這一個市場需求。2004年，由Muriel Derrien等人分離出Akkermansia屬第一株細菌Akkermansia muciniphila，研究者對Akkermansia muciniphila的功能研究發現該株細菌具有改善肥胖及Ⅱ型糖尿病患者的代謝情況，具有減肥降血糖的效果。現有技術中，分離得到的Akkermansia屬的細菌只有Akkermansia muciniphila這一種，對于該類細菌的分離方法也比較復雜，限制了益生菌的進一步推廣應用。

因此，研發出一種益生菌及其制備方法，用于解決現有技術中，益生菌種類單一、分離復雜的技術缺陷，成為了本領域技術人員亟待解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種益生菌及其制備方法，用于解決現有技術中，益生菌種類單一、分離復雜的技術缺陷。

本發明提供了一種益生菌，所述益生菌的保藏編號為：GDMCC60085。

本發明還提供了一種上述益生菌的制備方法，所述制備方法為：

步驟一、配置菌液：糞便與生理鹽水混勻后稀釋得稀釋液，所述稀釋液接種于粘蛋白液體培養基中，培養后得菌液；

步驟二、PCR擴增：以所述菌液為模板，使用針對Akkermansia屬的引物進行PCR，挑選PCR反應陽性管中的菌液接種于粘蛋白固體培養基上，培養后得菌落；

步驟三、培養純化菌落。

優選地，所述稀釋液中糞便濃度為10-6g/ml，所述稀釋液和所述粘蛋白液體培養基的體積比為1:9。

優選地，步驟一中所述培養的條件為：37℃厭氧培養，步驟一中所述培養的時間為4天。

優選地，所述針對Akkermansia屬的引物包括：引物一和引物二；

所述引物一的序列為CAGCACGTGAAGGTGGGGAC，所述引物二的序列為CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT。

優選地，步驟二中所述培養的條件為：37℃厭氧培養，步驟一中所述培養的時間為4天。

優選地，所述培養純化菌落得方法為：所述菌落接種于巧克力平板上培養后，將巧克力平板上的菌落接種于哥倫比亞血平板上進行純化培養出菌落

優選地，所述制備方法還包括：測序驗證，所述測序驗證方法在所述培養純化菌落步驟后進行。

本發明還提供了一種益生菌固態曲，所述益生菌固態曲由上述益生菌制得。

優選地，所述益生菌固態曲中，所述益生菌的活菌數量為10⁹cfu/g曲。

綜上所述，本發明提供了一種益生菌，所述益生菌的保藏編號為：GDMCC60085。本發明還提供了一種上述益生菌的制備方法，所述制備方法為：步驟一、配置菌液；步驟二、PCR擴增：步驟三、培養純化菌落。本發明還提供了一種益生菌固態曲，所述益生菌固態曲由上述益生菌制得。本發明提供的技術方案中，經全基因測序實驗，所制得的菌種可參與碳水化合物代謝以及脂肪代謝，同時還可以產生維生素和短鏈脂肪酸乙酸，是一種具有良好潛力的益生菌。同時，本發明提供的制備方法簡單易操作，適合大規模推廣應用。解決了現有技術中，益生菌種類單一、分離復雜的技術缺陷。

生物保藏說明

Norzea，分類命名：Akkermansia sp.，于2016年10月11日保藏在廣東省微生物菌種保藏中心，地址為廣州市先烈中路100號大院59號5樓，保藏編號為GDMCC No.60085。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據提供的附圖獲得其他的附圖。