[發(fā)明專利]黃花遠(yuǎn)志莖段組培高成苗率培育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611145727.4
• 申請(qǐng)日: 2016-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106577281B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳菁瑛;黃穎楨;趙云青;劉保財(cái)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35220
• 代理人: 方金芝;黃秀婷

1.黃花遠(yuǎn)志莖段組培高成苗率培育方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)采集及消毒外植體：采集黃花遠(yuǎn)志的帶有尚未萌發(fā)腋芽的半木質(zhì)化枝條，去除葉片，切取至少帶1個(gè)節(jié)間莖段作為外植體，并對(duì)其進(jìn)行消毒，之后放入無(wú)菌瓶中；

(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得腋芽：切去上述經(jīng)消毒的無(wú)菌外植體與消毒劑接觸的兩端部，留下具有至少1個(gè)節(jié)間的莖段，接著將莖段的形態(tài)學(xué)下端斜插于誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)15-20天，

腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)條件為：溫度18-22℃、無(wú)光照的黑暗條件；

(3)壯苗培養(yǎng)獲得強(qiáng)壯莖段：切割下經(jīng)步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)的腋芽并轉(zhuǎn)移至強(qiáng)壯腋芽生長(zhǎng)的壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行強(qiáng)壯腋芽生長(zhǎng)培養(yǎng)15-20天成莖段，

強(qiáng)壯腋芽生長(zhǎng)培養(yǎng)條件為：光照強(qiáng)度2000-2500lx、光照時(shí)間10-12h/d，溫度23-27℃，

(4)繼代增殖獲得組培莖段：將經(jīng)步驟(3)獲得的強(qiáng)壯莖段轉(zhuǎn)接至繼代增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽的增殖培養(yǎng)25-35天；

叢生芽的增殖培養(yǎng)條件為：溫度20-26℃，光照時(shí)間10-12h/d，光照強(qiáng)度2000-2500lx；

(5)誘根培養(yǎng)獲得誘根處理莖段：將經(jīng)步驟(4)產(chǎn)生的叢生芽從基部切割分離出成單芽，然后將高度大于等于3厘米的單芽轉(zhuǎn)入誘根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根處理成誘根處理莖段，

生根處理?xiàng)l件為：23-27℃溫度條件下全黑暗培養(yǎng)7-10天，然后再進(jìn)行光照培養(yǎng)25-35天，光照時(shí)間8-10h/d、光照強(qiáng)度2000-2500lx；

(6)試管外生根：將經(jīng)步驟(5)獲得的誘根處理莖段進(jìn)行加強(qiáng)光照培養(yǎng)3-5天，之后將誘根處理莖段放入扦插苗床中進(jìn)行試管外生根處理，然后均勻噴水，使誘根處理莖段和扦插苗床中的扦插基質(zhì)接觸緊密，之后進(jìn)行試管外生根管理，直至苗高大于等于8厘米；

試管外生根條件為：遮陽(yáng)網(wǎng)下具散射光、光照強(qiáng)度4000-5000lx，

試管外生根管理?xiàng)l件為：控制扦插苗床的白天和夜晚溫度分別為20℃-30℃和20℃-25℃，空氣濕度保持在85-90％，8-10天后用50％多菌靈可濕性粉劑800-1000倍液噴淋1次，開(kāi)始逐漸加強(qiáng)光照、逐漸減小空氣濕度，10-15天后噴施0.05％磷酸二氫鉀溶液1次；

所述的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：在1/2B5培養(yǎng)基中加入濃度為1.5-2.0mg/L的NAA、濃度為0.5-0.8g/L的活性炭、濃度為8-12g/L的蔗糖和濃度為7.0-7.8g/L的瓊脂，控制pH為5.5-6.5；

所述的壯苗培養(yǎng)基為：1/2B5培養(yǎng)基中加入濃度為0.3-0.5mg/L的NAA、濃度為0.5-0.8mg/L的6-BA、濃度為20-30mg/L的殼聚糖、濃度為20g/L的蔗糖和濃度為7.0-7.8g/L的瓊脂，控制上述壯苗培養(yǎng)基的pH為5.5-6.5；

所述的繼代增殖培養(yǎng)基為：B5培養(yǎng)基中加入濃度為0.3-0.5mg/L的NAA、濃度為2.7-3.5mg/L的6-BA、濃度為0.5-1.0g/L的胰蛋白胨、濃度為20g/L的蔗糖和濃度為6.5-7.3g/L的瓊脂，控制該繼代增殖培養(yǎng)基的pH為5.5-6.5；

所述的誘根培養(yǎng)基為：B5培養(yǎng)基中加入濃度為0.5-0.8mg/L的NAA、濃度為0.5g/L的活性炭、濃度為20g/L的蔗糖和濃度為6.7-7.5g/L的瓊脂粉，調(diào)節(jié)該誘根培養(yǎng)基的pH值為5.8-6.5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃花遠(yuǎn)志莖段組培高成苗率培育方法，其特征在于：步驟(5)時(shí)，將高度低于3厘米的單芽切成帶節(jié)莖段并將該帶節(jié)莖段轉(zhuǎn)入步驟(4)的繼代增殖培養(yǎng)基，按照步驟(4)的繼代增殖培養(yǎng)的方法繼續(xù)培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃花遠(yuǎn)志莖段組培高成苗率培育方法，其特征在于：所述的扦插苗床從下至上依次鋪設(shè)有3-5厘米的黃壤土層和4-6厘米的扦插層，所述的扦插層的扦插基質(zhì)由泥炭與河沙以1.5-1.8︰0.5-0.8混合均勻制成；當(dāng)扦插苗床鋪好后用稀釋600-700倍的多菌靈藥液噴透，再用與生根處理莖段粗度相配合的玻璃棒在扦插苗床上按株行距為5厘米×8厘米、插孔深度為1.5-2.5厘米進(jìn)行插孔。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃花遠(yuǎn)志莖段組培高成苗率培育方法，其特征在于：步驟(1)，所述的外植體取自連續(xù)5天以上晴天、且保持剪取前一天不澆水的露天栽培植株；剪成帶1個(gè)節(jié)間的莖段前，用質(zhì)量濃度為75％的酒精棉球搽拭外植體2遍以上，剪成帶1個(gè)節(jié)間的莖段后，用質(zhì)量濃度為0.1％的二氧化氯浸泡處理12-20分鐘，并用無(wú)菌水沖洗2-3遍。