[發明專利]雷公藤二萜合酶TwCPS1在制備松香烷型二萜化合物中的應用

有效

• 申請號: 201611144657.0
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN107058418B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 高偉;黃璐琦;蘇平;周家偉
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: C12P15/00
• 分類號: C12P15/00;C12P17/18;C12P17/04;C12N9/90;C12N15/61
• 代理公司: 北京鼎承知識產權代理有限公司11551
• 代理人: 張波濤,管瑩

1.雷公藤二萜合酶TwCPS1與丹參二萜合酶SmKSL1在提高松香烷型二萜類化合物前體次丹參酮二烯合成效率中的用途，所述雷公藤二萜合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述雷公藤二萜合酶基因的序列如SEQ ID NO：1所示。

2.如權利要求1所述雷公藤二萜合酶TwCPS1與丹參二萜合酶SmKSL1的用途，其特征在于雷公藤二萜合酶與丹參二萜合酶SmKSL1同時使用或先后使用。

3.如權利要求1所述雷公藤二萜合酶TwCPS1與丹參二萜合酶SmKSL1的用途，其特征在于先使用雷公藤合酶將GGPP催化形成CPP，再使用丹參二萜合酶SmKSL1催化CPP合成松香烷型二萜類化合物前體次丹參酮二烯。

4.一種提高松香烷型二萜類化合物前體次丹參酮二烯合成效率的方法，其包括：

(1)將雷公藤二萜合酶基因Twcps1表達盒插入第一原核表達載體中，制備表達外源雷公藤二萜合酶TwCPS1的重組大腸桿菌，超聲破碎菌體，取含有重組TwCPS1蛋白的上清液；

(2)將丹參二萜合酶基因Smksl1表達盒插入第二原核表達載體中，制備表達外源丹參二萜合酶SmKSL1的重組大腸桿菌，超聲破碎菌體，取含有重組SmKSL1蛋白的上清液；

(3)以GGPP為底物，以步驟(1)中獲得的含重組TwCPS1蛋白的上清液為催化劑，催化GGPP產生CPP；

(4)以步驟(3)獲得的CPP為底物，以步驟(2)獲得的含重組SmKSL1蛋白的上清液為催化劑，催化CPP產生松香烷型二萜類化合物前體。

5.如權利要求4所述提高松香烷型二萜類化合物前體次丹參酮二烯合成效率的方法，步驟(1)所述的原核表達載體為pMAL-c2X，所述Twcps1基因插入BamH I和Sal I之間。

6.如權利要求4所述提高松香烷型二萜類化合物前體次丹參酮二烯合成效率的方法，在步驟(3)的催化反應完成后還包括脫磷的步驟。

7.如權利要求4所述提高松香烷型二萜類化合物前體次丹參酮二烯合成效率的方法，在步驟(4)完成后還包括對反應產物進行GC-MS分析的步驟，其中在第13.06分出現的峰為次丹參酮二烯。