[發(fā)明專利]一種用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611143042.6
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN106632687B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設計）人: 蘇正定;成細瑤;陳蓉
• 申請（專利權）人: 湖北工業(yè)大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 北京久維律師事務所 11582
• 代理人: 杜權

1.一種用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白，所述融合蛋白包括測試序列、結(jié)合序列和連接臂序列；

所述測試序列為MdmX序列或包含MdmX序列中的p53結(jié)合結(jié)構域的MdmX片段；

所述結(jié)合序列為保持與MdmX有結(jié)合活性的包含p53序列中的MdmX結(jié)合結(jié)構域的p53片段的突變體；

所述連接臂序列為一個肽段，所述連接臂的上下游分別與所述測試序列和所述結(jié)合序列之一連接；所述連接臂的氨基酸序列不參與所述融合蛋白的二級結(jié)構的形成或維持；所述連接臂的長度和柔性足以使所述測試序列的空間結(jié)構的任一表面部分與所述結(jié)合序列的空間結(jié)構的任一表面部分在空間上有機會相接觸；

該融合蛋白用式p53p^F19A-XX-N-MdmX或p53p^L26A-XX-N-MdmX表示，其特征在于，

p53p^F19A或p53p^L26A代表所述結(jié)合序列，p53p^F19A具體為：SQETASDLWKLLPEN，p53p^L26A具體為：SQETFSDLWKLAPEN；

XX代表所述連接臂序列SEQ ID NO.2，具體為：GSGSSENLYFQ；

N-MdmX代表所述測試序列SEQ ID NO.3，具體為：GSQINQVRPKLPLLKILHAAGAQGEMFTVKEVMHYLGQYIMVKQLYDQQEQHMVYCGGDLLGELLGRQSFSVKDPSPLYDMLRKNLVTLAT。

2.如權利要求1所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的上游或下游具有用于蛋白分離和/或純化的標簽序列。

3.一種用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白的表達載體，其特征在于，所述表達載體能夠借助宿主表達如權利要求1或2所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱Mdmx抑制劑的抑制活性的融合蛋白。

4.如權利要求3所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白的表達載體，其特征在于，所述載體是pET-28a載體，所述宿主是大腸桿菌BL21(DE3)。

5.如權利要求1或2所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白在篩選弱MdmX抑制劑或測試弱MdmX抑制劑的抑制活性的用途，其特征在于，所述弱MdmX抑制劑是能夠與p53競爭性結(jié)合MdmX的抑制劑。