[發(fā)明專利]檢測馬杜霉素的時間分辨熒光免疫試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611141853.2 | 申請日： | 2016-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN108226499A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 洪霞;劉靜;立雯馨 | 申請（專利權(quán)）人： | 丹陽億太生物科技發(fā)展有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/531;G01N33/533 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 212009 江蘇省鎮(zhèn)*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 制備 熒光免疫分析試劑 時間分辨熒光免疫分析 時間分辨熒光免疫 單克隆抗體 多孔包被板 抗體凍干品 霉素標(biāo)準(zhǔn)品 羊抗鼠抗體 樣品前處理 檢測試劑 特異性強(qiáng) 現(xiàn)場操作 包被原 緩沖液 靈敏度 免疫原 前處理 試劑盒 洗滌液 增強(qiáng)液 種檢測 銪標(biāo)記 熒光 回收率 分辨 應(yīng)用 | ||
1.一種檢測馬杜霉素的時間分辨熒光免疫分析試劑盒，其特征在于：由多孔包被板，緩沖液，馬杜霉素標(biāo)準(zhǔn)品，馬杜霉素的抗體凍干品，銪標(biāo)記的羊抗鼠抗體，洗滌液和增強(qiáng)液所組成。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測馬杜霉素的時間分辨熒光免疫分析試劑盒，包括免疫原、包被原和單克隆抗體的制備以及樣品前處理，其特征在于：
(1) 將馬杜霉素與牛血清白蛋白偶聯(lián)，得到免疫原；
(2) 將馬杜霉素與卵血清蛋白偶聯(lián)，得到包被原；
(3) 用步驟(1)的免疫原免疫小鼠，通過雜交瘤技術(shù)，得到分泌抗馬杜霉素的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；
(4) 以體內(nèi)誘生腹水法大量制備抗體，使用Protein G柱進(jìn)行純化，獲得抗馬杜霉素的單克隆抗體
(5) 用步驟(2)的包被原包被固相載體；
(6) 將動物組織先經(jīng)過酸解提取后，再過MAX柱凈化，最后加入衍生試劑和催化劑進(jìn)行處理，得到待測產(chǎn)物；
(7) 將步驟(6)的待檢物進(jìn)行測量熒光強(qiáng)度cps，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中的馬杜霉素馬杜霉素含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測馬杜霉素的時間熒光免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述的固相載體是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作為固相載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測馬杜霉素的時間熒光分辨免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述的衍生試劑是丁胺。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測馬杜霉素的時間分辨熒光免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述的催化劑是腈基磷酸二乙酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測馬杜霉素的時間熒光免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述步驟(6)和(7)具體為取包被有馬杜霉素-OVA的微孔包被板，加入50 μL處理好的樣品到各自的微孔中，加入50 μL以緩沖液稀釋的馬杜霉素抗體，25~37℃振蕩0.5~1小時，洗滌液洗三次，加以緩沖液稀釋的100 μL Eu3+-羊抗鼠抗體，25~37℃振蕩0.5~1小時，洗滌液洗六次，加200 μL增強(qiáng)液振蕩5分鐘后測量熒光強(qiáng)度cps，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中的馬杜霉素含量。
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