[發(fā)明專利]吩嗪-1-羧酸作為水母毒素蛋白酶抑制劑的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611139840.1
• 申請(qǐng)日: 2016-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN106727577B
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于華華;岳洋;李榮鋒;邢榮娥;劉松;王雪芹;李克成;陳曉琳;秦玉坤;李鵬程
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): A61K31/498
• 分類號(hào): A61K31/498;A61P39/02;A61P43/00
• 代理公司: 山東康橋律師事務(wù)所 37250
• 代理人: 柳彥君

本發(fā)明公開了吩嗪?1?羧酸作為水母毒素蛋白酶抑制劑的用途，所述的吩嗪?1?羧酸的結(jié)構(gòu)式如式Ⅰ所示。所述抑制劑配制方法：將吩嗪?1?羧酸用二甲基亞砜(DMSO)溶解后，再用50mM Tris?HCl(pH 8.8)緩沖液稀釋制得。本發(fā)明為篩選抗水母毒素的小分子化合物提供理論參考，也為水母蜇傷藥物的研制奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種吩嗪-1-羧酸作為水母毒素蛋白酶抑制劑的用途。

背景技術(shù)

近年來(lái)，水母數(shù)量激增，水母蜇傷事件頻繁發(fā)生，嚴(yán)重影響海濱旅游、海洋捕撈、海軍訓(xùn)練及海上運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目等涉海活動(dòng)。水母蜇傷已成為最常見的海洋生物蜇傷，據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院估計(jì)，全球每年有1.5億人被水母蜇傷，其中不乏死亡病例。水母屬于刺胞動(dòng)物，刺細(xì)胞是刺胞動(dòng)物特有的攻擊防衛(wèi)性細(xì)胞。當(dāng)水母觸及人體時(shí)，從刺胞中伸出刺絲，即刻刺入皮膚并注入毒液引起皮膚反應(yīng)。被水母蜇傷后，即感到刺癢、麻痛或灼燒感，以后局部發(fā)生紅斑、丘疹或蕁麻疹樣皮疹，奇癢無(wú)比，影響日常生活，特別是睡眠。

水母毒素是蜇傷的物質(zhì)基礎(chǔ)，成分復(fù)雜，主要為蛋白和肽類毒素，具有多種生物活性，如溶血性、酶活性、神經(jīng)毒活性、細(xì)胞毒活性以及對(duì)心血管系統(tǒng)的活性等。復(fù)雜的毒素成分和蜇傷機(jī)理導(dǎo)致水母蜇傷治療非常困難。隨著水母毒素研究的深入，水母毒素中的酶類成分，如金屬蛋白酶、磷脂酶，吸引了越來(lái)越多的關(guān)注。由于酶類毒素在已知的生物毒素中占相當(dāng)比例，如蛇毒中酶類毒素的數(shù)量占已知的蛇毒總量的23％，并且在蛇毒咬傷引發(fā)的生理病理性癥狀中起重要作用。因此，水母毒素中存在的酶類毒素也可能是理解水母蜇傷的關(guān)鍵。

吩嗪-1-羧酸可抑制多種農(nóng)業(yè)病原真菌，主要作為抗菌劑應(yīng)用。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，吩嗪-1-羧酸可以有效抑制水母毒素中的重要酶類成分。這一發(fā)現(xiàn)，不僅拓寬了吩嗪-1-羧酸的應(yīng)用范圍，也為篩選抗水母毒素的小分子化合物提供參考，同時(shí)為研制水母蜇傷藥物奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供吩嗪-1-羧酸作為水母毒素蛋白酶抑制劑的用途。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的方案如下：

吩嗪-1-羧酸作為水母毒素蛋白酶抑制劑的用途，所述吩嗪-1-羧酸的結(jié)構(gòu)式如式Ⅰ所示。

優(yōu)選的，所述抑制劑配制方法：將吩嗪-1-羧酸用二甲基亞砜(DMSO)溶解后，再用50mM Tris-HCl(pH 8.8)緩沖液稀釋制得。

吩嗪-1-羧酸抑制水母毒素蛋白酶活性的實(shí)驗(yàn)方法為：吩嗪-1-羧酸用二甲基亞砜(DMSO)溶解后，再用50mM Tris-HCl(pH 8.8)緩沖液稀釋得到吩嗪-1-羧酸溶液。然后向水母毒素中加入吩嗪-1-羧酸溶液，使吩嗪-1-羧酸與水母毒素(以蛋白計(jì))的質(zhì)量比大于或等于0.70:1，37℃條件預(yù)處理60min后，向以上混合物中加入底物偶氮酪蛋白(azocasein)啟動(dòng)反應(yīng)。將以上反應(yīng)混合物置于37℃下反應(yīng)90min，反應(yīng)完成后，室溫下加5％三氯乙酸(w/w)。靜置30min后15000g離心15min，取150μL上清液加入到96孔板中，然后加150μL 0.5MNaOH中和多余三氯乙酸后，用酶標(biāo)儀測(cè)量A_450nm，根據(jù)以下公式計(jì)算抑制率。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

1)、本發(fā)明利用吩嗪-1-羧酸抑制水母毒素蛋白酶活性，指出吩嗪-1-羧酸可作為蛋白酶抑制劑使用，擴(kuò)展了吩嗪-1-羧酸的應(yīng)用范圍。

2)、本發(fā)明為篩選抗水母毒素的小分子化合物提供理論參考，也為水母蜇傷藥物的研制奠定基礎(chǔ)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中吩嗪-1-羧酸與水母毒素(以蛋白計(jì))在不同質(zhì)量比條件下，吩嗪-1-羧酸抑制水母毒素蛋白酶活力圖。

具體實(shí)施方式