[發明專利]用于檢測雌激素化合物的重組酵母及其構建方法

有效

• 申請號: 201611138357.1
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106754444B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 王海勝;趙百鎖;佟繼旭
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院研究生院
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12N15/65;C12Q1/6897;C12R1/865
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

1.一種重組菌，為在酵母中表達雌激素受體β基因和含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒，得到的重組菌；

所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒依次包括所述3個串聯ERE基因、驅動報告基因表達的啟動子和所述報告基因；

所述驅動報告基因表達的啟動子為部分ADH1；

所述部分ADH1的核苷酸序列為序列4第1860-2269位；

所述重組菌中還表達抗性基因表達盒；

所述3個串聯ERE基因的核苷酸為序列表中序列4第1815-1853位；

所述在酵母中表達雌激素受體β基因為將所述雌激素受體β基因以重組載體的方式導入所述酵母中進行表達；

所述在酵母中表達雌激素受體β基因、抗性篩選基因表達盒和含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒為將同源重組片段整合到所述酵母基因組中進行表達；

所述同源重組片段包括所述抗性篩選基因表達盒和所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒的片段；

所述重組載體為將所述雌激素受體β基因插入表達載體中，且表達所述雌激素受體β基因的載體；

所述重組載體中，驅動所述雌激素受體β基因表達的啟動子為序列表中序列2所示的DNA分子；

所述雌激素受體β基因的核苷酸序列為序列1第7-1599位；

所述抗性篩選基因表達盒的抗性篩選基因為卡那霉素抗性基因；

所述抗性篩選基因表達盒的核苷酸序列為序列4第540-1853位；

所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒的報告基因為GFP基因，所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒的核苷酸序列為序列4第1815-3242位；

所述表達載體為p426 GDP載體；

所述同源重組片段的核苷酸序列為序列4第33-3748位；

所述同源重組片段通過整合質粒介導的同源重組整合；

所述整合質粒的核苷酸序列為序列4；

所述酵母為釀酒酵母。

2.一種構建重組菌的方法，包括如下步驟：將雌激素受體β基因和含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒導入所述酵母，得到重組菌；

所述方法還包括將抗性篩選基因表達盒導入所述酵母；

所述雌激素受體β基因以重組載體的方式導入所述酵母中進行表達；

所述抗性篩選基因表達盒和所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒通過同源重組片段整合到所述酵母基因組中進行表達；

所述同源重組片段包括所述抗性篩選基因表達盒和所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒；

所述重組載體為將所述雌激素受體β基因插入表達載體中，且表達所述雌激素受體β基因的載體；

所述重組載體中，驅動所述雌激素受體β基因表達的啟動子為序列表中序列2所示的DNA分子；

所述雌激素受體β基因的核苷酸序列為序列1第7-1599位；

所述抗性篩選基因表達盒的抗性篩選基因為卡那霉素抗性基因；

所述抗性篩選基因表達盒的核苷酸序列為序列4第540-1853位；

所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒的報告基因為GFP基因，所述含有3個串聯ERE基因的報告基因表達盒的核苷酸序列為序列4第1815-3242位；

所述表達載體為p426 GDP載體；

所述同源重組片段的核苷酸序列為序列4第33-3748位；

所述同源重組片段通過整合質粒介導的同源重組整合；

所述整合質粒的核苷酸序列為序列4；

所述酵母為釀酒酵母。

3.權利要求1所述重組菌在制備檢測雌激素化合物產品中的應用。

4.檢測雌激素化合物產品，包括權利要求1所述重組菌。