[發(fā)明專利]無血清細胞培養(yǎng)基及高效表達重組蛋白質的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611137227.6 | 申請日： | 2016-12-09 |
| 公開（公告）號： | CN108220334A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發(fā)明（設計）人： | 郭亞軍;寇庚;王延兵;張小萌;徐進;張存超 | 申請（專利權）人： | 上海邁泰君奧生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C07K19/00;C12N5/075 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201203 上海市浦東新*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 無血清細胞培養(yǎng)基 雙功能融合蛋白 基礎培養(yǎng)基 高效表達 培養(yǎng)基 無血清培養(yǎng)基 培養(yǎng)基組成 重組蛋白質 苯丙氨酸 甲硫氨酸 精氨酸 補充 鳥苷 腺苷 胸苷 修飾 | ||
1.一種新型CD47/PD-L1雙功能融合蛋白的制備方法，包括以下步驟：a）一種新型抗CD47/PD-L1雙功能融合蛋白：CD47結合部分具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列；PD-L1結合部分的輕鏈具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列，重鏈具有SEQ ID NO: 6的氨基酸序列；b）利用步驟a）所得核苷酸片斷構建重組質粒，轉染宿主細胞，篩選高表達克隆；c）使用改進的無血清細胞培養(yǎng)基大規(guī)模培養(yǎng)，獲得抗CD47/PD-L1雙功能融合蛋白，分離純化；其特征在于，所述的改進的無血清細胞培養(yǎng)基由基礎培養(yǎng)基和補充培養(yǎng)基組成，基礎培養(yǎng)基中添加胞苷、尿苷、鳥苷、胸苷和腺苷，補充培養(yǎng)基中添加精氨酸、苯丙氨酸及甲硫氨酸。
2.根據權利要求1所述的一種新型CD47/PD-L1雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述使用無血清細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的溫度為35℃~37℃。
3.根據權利要求2所述的一種新型CD47/PD-L1雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述使用無血清細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的溫度為36℃。
4.根據權利要求1所述的一種新型CD47/PD-L1雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述使用無血清細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的pH值為6.5~7。
5.根據權利要求1所述的一種新型CD47/PD-L1雙功能融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述使用無血清細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)的pH值為6.9。
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