[發明專利]一種以谷氨酰胺轉移酶為交聯劑的體內止血敷料的制備方法

有效

• 申請號: 201611137107.6
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106729957B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 范代娣;惠俊峰;米鈺;馬曉軒;馬沛;劉琳
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: A61L26/00
• 分類號: A61L26/00;A61L24/10;A61L24/00
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司 61202
• 代理人: 謝鋼

本發明公開了一種體內止血敷料的制備方法，該方法向類人膠原蛋白溶液中加入谷氨酰胺轉氨酶進行交聯后，通過設定的降溫速度進行精確降溫預凍，并真空冷凍干燥，然后Co60照射滅菌，最終獲得一種體內止血敷料。本發明制備方法本發明所制備的體內止血敷料安全性高，生物相容性好，止血效果顯著，可用作各類創面止血和術后止血，在醫用生物材料與組織工程等相關領域有著良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種體內止血敷料的制備方法，特別涉及一種以谷氨酰胺轉移酶為交聯劑的體內止血敷料的制備方法，屬于生物醫用材料領域。

背景技術

膠原蛋白是一種高分子蛋白，一般呈白色、不透明的纖維狀。它是生物體組成結構的主要成分之一，廣泛地分布于動物的皮膚、骨骼和肌肉組織內。膠原具有止血性能，一方面可加強血小板的黏附和聚集形成血栓，阻止血液流出。另一方面，通過激活和誘導各種凝血因子還可啟動內源性的凝血途徑。但是膠原蛋白多來源于動物皮、筋腱等，可加工性差，在提取過程中會使蛋白部分生物活性喪失，而且其對人體而言屬于一種異源物，可引起過敏等不良反應，應用于人體非常容易產生排異反應。因此需要尋找一種制備簡單、安全性高的膠原蛋白作為原料。

谷氨酰胺轉移酶是人體組織中本來就含有的一種酶，可與膠原蛋白發生交聯反應，谷氨酰胺轉移酶以肽鍵中谷氨酰胺殘基的γ-羧酰胺基作為酰基的供體，以多肽鏈中賴氨酰殘基于氨基作為酰基的受體，形成蛋白質分子內和分子間的ε-γ（-谷氨酰）賴氨酸異肽鍵。熱交聯是在真空條件下加熱，使膠原分子嚴重脫水，自由羧基和羥基發生酯化反應以及羧基與氨基之間發生酰胺反應，從而改善止血敷料的機械性能，而且還可以保持止血敷料的內部孔狀結構不變，使孔隙均勻完整。

發明內容

本發明的目的是提供一種使用安全、可吸收、止血效果好的體內止血敷料的制備方法。

本發明的實現過程如下：

一種體內止血敷料的制備方法：以類人膠原蛋白為原料，加入注射用水攪拌溶解后，向類人膠原蛋白溶液中加入谷氨酰胺轉氨酶進行交聯后，通過控制降溫速率為4-8 ℃/min進行降溫預凍，真空冷凍干燥，Co60照射滅菌后得到體內止血敷料。

上述的類人膠原蛋白為使用基因重組大腸桿菌高密度發酵生產的一種人源型膠原蛋白。

上述的類人膠原蛋白加入注射用水后的質量濃度為1%-5%；谷氨酰胺轉氨酶與類人膠原蛋白的比例為4-8U/g。

具體來說，上述的體內止血敷料的制備方法，包括如下步驟：

（1）將類人膠原蛋白溶解于注射用水中，使溶液中類人膠原蛋白的質量濃度為1%-5%；

（2）將溶液移入一次性無菌培養皿或模具中，每皿或每模具7-15 mL；

（3）加入谷氨酰胺轉氨酶，谷氨酰胺轉氨酶與類人膠原蛋白的比例為4-8U/g，反應溫度為-4-0℃，交聯時間為24-48小時；

（4）預凍過程中，降溫速率控制為4-8 ℃/min；

（5）樣品凍干處理24-72 h，凍干好的樣品Co60照射滅菌10-30 h。

本發明具有以下優點：

（1）本發明所涉及的膠原蛋白為基因工程菌高密度發酵的人源性膠原蛋白，它從根本上解決了動物提取膠原蛋白的水不溶性和病毒隱患等問題，具有生物相容性好、促細胞生長、無病毒隱患和免疫排異反應低等優點，提高了體內止血敷料的安全性；

（2）本發明采用酶法交聯，具體使用谷氨酰胺轉氨酶交聯膠原蛋白制備體內止血敷料，可以改善止血敷料的機械強度，提高止血效果，而且谷氨酰胺轉移酶是人體組織中本身就含有的一種酶，其安全無毒，制備的止血敷料應用于臨床時保證了其良好的生物安全性；