[發明專利]通過靜電紡絲制備載藥細胞爬片的方法

有效

• 申請號: 201611136529.1
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106754367B
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 張梅;馬亞莉;孫大輝;李子琪;曾潔慧
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12M3/04
• 分類號: C12M3/04;D04H1/728;D01F8/14;D01F8/02
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 趙炳仁

本發明提供了一種通過靜電紡絲制備載藥細胞爬片的方法，是以玉米醇溶蛋白和高分子材料聚乳酸為原料，通過靜電紡絲獲得在蓋玻片外圍包裹有同軸殼核層纖維膜的載藥細胞爬片。采用生物相容性良好的玉米醇溶蛋白和高分子材料聚乳酸為藥物載體材料，安全無毒，可體內降解。利用靜電紡絲的方法制備出的覆蓋普通蓋玻片的載藥納米纖維膜具有三維多孔結構，有利于細胞培養時細胞的粘附、生長和增殖。本載藥細胞爬片解決了將蓋玻片置于培養皿底部被夾持時出現的不穩定，如傾覆和側翻等現象，克服了現有細胞爬片制備技術存在的缺點，有效的提高了細胞培養的實驗效果，利于推廣。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域用于細胞培養的細胞爬片的制備方法，特別涉及一種通過靜電紡絲機制備載藥細胞爬片的方法。

背景技術

在進行生物學實驗和細胞培養時，需要經常使用細胞爬片，細胞爬片是將蓋玻片浸在細胞培養基中，使其在玻片上能夠生長，細胞爬片根據實驗需要有圓形和方形的，并且大小不同。利用細胞爬片進行體外實驗的時候，可以很好的排除體內諸多的干擾因素對實驗結果的影響，因此，制備細胞爬片是體外細胞培養的一種重要技術。

靜電紡絲技術制備的納米纖維膜結構類似于細胞外基質，其三維立體結構使得材料具有高比表面積，且便于制備，已被廣泛應用于組織工程中。玉米醇溶蛋白(Zein)是從天然材料玉米蛋白粉中提取出來的，具有良好成膜性能，已經在藥物釋放領域有了深入的研究。申請號為201210084617.7的專利中，記載了用于細胞培養的載體材料，即玉米醇溶蛋白和聚乙烯醇靜電紡出的納米纖維膜的制備方法。

關于制備細胞爬片的方法，在申請號為201410141763.8的專利一文中，僅記載了一種直接將消毒后的爬片浸入到培養液內，而后放入培養板中，將細胞懸垂液加入進行培養的方法。申請號為201510175512.6的文獻中，公開了一種對玻片表面進行處理的方法，但仍然沒有任何載藥細胞爬片的制備，從而適用不同細胞培養需求的記載。

因此，制備安全無毒、可降解的載藥細胞爬片，成為亟待解決的課題。

發明內容

本發明的目的是為解決目前存在的上述技術問題，提供一種通過靜電紡絲制備載藥細胞爬片的方法，這種方法可根據細胞培養過程中所需藥量來控制載藥量，簡單易行，實用性強。

本發明通過靜電紡絲制備載藥細胞爬片的方法，包括如下步驟：

a.取普通蓋玻片，用蒸餾水浸泡沖洗干凈后，置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌備用，滅菌條件為121℃，20min；

b.稱取玉米醇溶蛋白、聚乳酸，分別溶于六氟異丙醇中，配制成質量百分比濃度分別為14％和6％的殼層和核層紡絲溶液，并向殼核層溶液中分別加入設定量的地塞米松(DEX)和重組人骨形態發生蛋白2(rhBMP-2)，磁力攪拌4h備用；

c.用步驟b制得的紡絲溶液在靜電紡絲機上紡絲，紡絲電壓為15KV，紡絲速度殼核層分別為0.8ml/h和0.6ml/h，紡絲距離為12cm，當紡絲層達到設定厚度后，將步驟a所述的滅菌蓋玻片放置在該紡絲層上，再繼續紡絲至設定厚度，紡絲結束；

d.紡絲結束，將步驟c獲得的紡絲物從靜電紡絲機的接收裝置取下，切割整形后放入真空干燥箱干燥后即獲得以蓋玻片為基板，其外圍包裹有同軸殼核層纖維膜的載藥細胞爬片。

步驟b中所述加入的DEX為殼層紡絲溶液中玉米醇溶蛋白質量的5％，加入的rhBMP-2為核層紡絲溶液中聚乳酸質量的0.012％～0.03％。根據細胞實驗需求可選取其它藥物種類和質量。

本發明采用的蓋玻片直徑為13mm，制備出的細胞爬片直徑為14mm。

本發明與現有技術相比具有如下有益效果：