[發明專利]一種固液雙相酶解與超濾聯用制備超低分子量透明質酸寡糖及其鹽的方法有效
| 申請號： | 201611127881.9 | 申請日： | 2016-12-09 |
| 公開（公告）號： | CN108220364B | 公開（公告）日： | 2020-06-05 |
| 發明（設計）人： | 喬莉蘋;申鳳同;陸震;薛蔚;呂旸;范馨儀;石艷麗;郭學平 | 申請（專利權）人： | 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C12P19/26 | 分類號： | C12P19/26;C12P19/14;C08B37/08 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 賈波 |
| 地址： | 250101 山東省濟*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 固液雙相酶解 超濾 聯用 制備 分子量 透明 寡糖 及其 方法 | ||
1.一種固液雙相酶解與超濾聯用制備超低分子量透明質酸寡糖及其鹽的方法，其特征是包括以下步驟：
（1）酶解緩沖液準備：調節純化水pH為4~9、溫度為20~48℃，然后加入芽孢桿菌透明質酸酶，配成酶解緩沖液；
（2）固液雙相酶解：在攪拌下向酶解緩沖液中加入氧化鋯分散珠，再快速加入高分子量的透明質酸或其鹽固體至其質量體積濃度為5~25%，攪拌混勻，得到透明質酸-酶解液固液雙相酶解體系；在攪拌下酶解至至固液雙相酶解體系轉變為液液單相酶解體系后，再次快速加入高分子量的透明質酸或其鹽固體至其質量體積濃度為5~25%，攪拌混勻形成透明質酸-酶解液固液雙相酶解體系，繼續攪拌酶解，直至固液雙相酶解體系轉變為液液單相酶解體系；
（3）超濾：酶解體系變為液液單相酶解體系時，將酶解反應液與超濾系統連接，邊超濾邊酶解，直至酶解反應液中的透明質酸或其鹽的分子量≤3kDa，控制超濾條件使酶解結束時超濾濾出的清液體積為酶解反應液的40-60%；
（4）后處理：合并超濾濾出的清液和剩余的酶解反應液，進行滅活、活性炭吸附、過濾處理，過濾所得濾液進行噴霧干燥，得到分子量≤3kDa的超低分子量透明質酸寡糖及其鹽。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征是：所述芽孢桿菌透明質酸酶為芽孢桿菌（
3.根據權利要求1所述的方法，其特征是：所述高分子量的透明質酸及其鹽固體的分子量大于10kDa；所述高分子量的透明質酸鹽為透明質酸的鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽或鋅鹽。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征是：所述高分子量的透明質酸及其鹽固體的分子量為100kDa~1000kDa。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征是：步驟（2）中，在30-40rmp的攪拌速度下加入高分子量的透明質酸及其鹽固體，加入后再在此速度下攪拌3-5min，然后將攪拌速度調整為15-20rpm，進行固液雙相酶解；當超濾與酶解反應液連接后，酶解攪拌速度調整為80-100rpm。
6.根據權利要求1或5所述的方法，其特征是：步驟（2）中，每次加入高分子量的透明質酸及其鹽固體時，加入時間控制在5-15min內。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征是：步驟（2）中，每次加入的高分子量的透明質酸及其鹽固體在體系中的質量體積濃度為10~18%；步驟（3）中，超濾系統中的超濾膜的截留分子量為3kDa。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征是：步驟（2）中，酶解溫度為20~48℃，酶解pH為4-9。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征是：步驟（2）中，酶解溫度為30~45℃，酶解pH為5.5~7.5。
10.根據權利要求1所述的方法，其特征是：步驟（2）中，由固液雙相酶解體系轉變為液液單相酶解體系所需的酶解時間為0.5-2h；超濾與酶解聯合的酶解時間為1-6h。
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