[發(fā)明專利]一種自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌劑的馴化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611127327.0
• 申請(qǐng)日: 2016-12-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106701617B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李穎;孫永明;袁振宏;孔曉英;李連華;王忠銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院廣州能源研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/36;C12P5/02
• 代理公司: 44001 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 蔣歡妹;莫瑤江

1.一種自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌系的馴化方法，其特征在于，該方法以沼氣發(fā)酵液的胞外聚合物為接種物，以丙酸為碳源，該方法包括以下步驟：取分泌胞外聚合物的沼氣發(fā)酵液，分離得到胞外聚合物接種到丙酸產(chǎn)甲烷的選擇性培養(yǎng)基中，放入?yún)捬跗繐u床中37℃進(jìn)行培養(yǎng)3-4周直至培養(yǎng)基中出現(xiàn)球團(tuán)狀的微生物凝集體；再取菌團(tuán)加入新鮮的培養(yǎng)基，培養(yǎng)7-10天馴化得到的自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌團(tuán)；所述選擇性培養(yǎng)基配制方法為：在1L水中加入400mgNH₄Cl、250mg MgSO₄·6H₂O、400mg KCl、120mg CaCl₂·2H₂O、80mg(NH₄)₂HPO₄、55mg FeCl₃·6H₂O、5000mg NaHCO₃，還加入CoCl₂·6H₂O、NiCl₂·6H₂O、MnCl₂·4H₂O、CuCl₂·2H₂O、AlCl₃·6H₂O、ZnCl₂、Na₂WO₄·2H₂O、H₃BO₃、Na₂SeO₃、Ma₂MoO₄·2H₂O各0.0005mg，此外還加入丙酸鈉4200mg，pH調(diào)節(jié)至7.0。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌系的馴化方法，其特征在于，所述分泌胞外聚合物的沼氣發(fā)酵液，其判斷方法為，大于10000rpm的轉(zhuǎn)速下離心沼氣發(fā)酵液10-15min后，出現(xiàn)發(fā)酵液分為三層的現(xiàn)象，上層清澈透明，中間層粘稠乳白色，底層含固體雜質(zhì)黑色。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌系的馴化方法，其特征在于，所述的分離得到胞外聚合物，指大于10000rpm的轉(zhuǎn)速下離心分泌胞外聚合物的沼氣發(fā)酵液10-15min后，發(fā)酵液分為三層，去掉上層的澄清透明液體及底層的固體沉淀，收集中間層的粘稠乳白色物質(zhì)，大于10000rpm的轉(zhuǎn)速下再次離心粘稠乳白色物質(zhì)15min，收集沉淀的菌泥作為接種物。

4.一種自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌劑的應(yīng)用，其特征在于，權(quán)利要求1馴化后得到的自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌用于生物強(qiáng)化沼氣發(fā)酵。

5.一種自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌固體菌劑的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求1馴化后得到的自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌的菌液經(jīng)離心，棄去液體部分后置于厭氧環(huán)境下室溫風(fēng)干，收集固體粉末并真空密封保存得到目標(biāo)產(chǎn)物。

6.一種液體濃縮自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌劑的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求1馴化后得到的自凝集丙酸產(chǎn)甲烷菌菌液經(jīng)離心，收集全部的固體沉淀及少許上清液，利用滅菌的液體甘油封液面以隔絕空氣，-20℃保存。