[發明專利]一種油佐劑疫苗的破乳方法

有效

• 申請號: 201611124393.2
• 申請日: 2016-12-08
• 公開（公告）號: CN106814152B
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 石海芳;馬貴軍;俞愛敏;張新廉
• 申請（專利權）人: 申聯生物醫藥（上海）股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

本發明提供了一種油佐劑疫苗的破乳方法包括如下步驟：油佐劑疫苗與破乳劑混合，經分層后，得到水相抗原樣品；所述破乳劑包括有機溶劑與酸的混合物，所述有機溶劑選自乙腈、正丁醇、苯甲醇、丁基二乙二醇、乙醇中的一種，所述酸選自鹽酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸中的一種。本發明提供的破乳方法破乳能力更強，能保證抗原主要分布于水相中，且水相與油相能完全分離，能真實反應出疫苗內有效抗原的含量及質量，抗原回收率可達90％以上。本發明的破乳方法破乳更完全，更迅速，破乳效率更高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及一種油佐劑疫苗的破乳方法。

背景技術

現有的疫苗質量標準中規定效力檢驗必須采用本動物進行檢驗，由于國家實行100％的強化免疫政策，很難選出易感的檢驗用動物，而且動物攻毒對實驗設施要求高(BSL3級實驗室)、耗時長(一個月以上)、資金花費大。如果采用血清中和試驗選擇易感動物，在技術上難以排除具有細胞免疫的非易感動物，在檢驗實際中經常發生檢驗數據不規律的問題，影響檢驗的準確性。因此口蹄疫疫苗尤其是用于牛的疫苗的質量檢測一直困擾著獸藥監測部門和相關生產企業。因此需要盡快研制體外檢驗技術，代替現有的本動物試驗。

當前國家對疫苗的檢驗正逐步過渡到對疫苗內抗原的檢測，而當前較為普遍的方法為疫苗破乳后對抗原進行檢測，通過將疫苗進行破乳處理，使抗原轉移至水相中，繼而對其進行后續的檢測分析，然而現有的破乳方法及破乳劑并不適用于所有的油佐劑疫苗，使用傳統破乳劑對油佐劑疫苗進行破乳，雖然能將疫苗破乳，但是其水相中的抗原含量極低。不同破乳劑的破乳效率與破乳效果層次不齊。

雖然業內已有破乳方法，但其效率和效果均不佳，傳統的破乳方法破乳后會有種種問題，例如不同疫苗使用不同破乳劑、破乳不完全、水相和油相分界不清晰、水相中檢測不到抗原等問題一直困擾著業界。如何去尋找一種通用且高效的破乳方法及如何使得疫苗內抗原進入水相成了業內亟待解決的問題。

中國專利CN 103088157B中提到在提取所述口蹄疫病毒RNA時，加入正戊醇作為破乳劑。但以正戊醇為破乳劑，其效率低，適用并不廣泛，且針對合成肽疫苗時其水相中并不能檢測到抗原組分，而本發明破乳時間短，在加入破乳劑后既能完成破乳，離心后取水相即可抽取水相，并能夠明顯提高抗原的回收。

發明內容

針對現有技術中的缺陷，本發明的目的是提供一種油佐劑疫苗的破乳方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種油佐劑疫苗的破乳方法，包括如下步驟：油佐劑疫苗與破乳劑混合，經分層后，得水相抗原樣品；

所述破乳劑包括有機溶劑與酸的混合物，所述有機溶劑選自乙腈、正丁醇、苯甲醇、丁基二乙二醇、乙醇中的一種，所述酸選自鹽酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸中的一種。破乳后水相經液相色譜檢測，抗原回收率可達90％以上。

優選地，破乳劑中有機溶劑選自乙腈、乙醇中的一種，酸選自三氟乙酸、鹽酸中的一種。

優選地，油佐劑疫苗與破乳劑按體積比9:1～5:5進行混合。破乳劑含量過高會增加后續對水相樣品凍干或濃縮的處理時間，過低則無法破乳。

優選地，所述破乳劑中酸與有機溶劑的體積比為(0.05～0.5)：100。

優選地，所述油佐劑疫苗包括口蹄疫疫苗。

優選地，所述破乳方法還包括將水相抗原樣品進行凍干或濃縮處理，即得抗原樣品；所述凍干的條件為：-80～-50℃溫度下真空冷凍12～18h。

采用本發明的破乳方法，由于抗原回收率高，得到的抗原樣品無需進一步純化，即可直接用于抗原的定量定性檢測。