[發明專利]一種人ZNF295多肽及其抗體制備方法

在審

• 申請號: 201611112736.3
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN108117593A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 江虹
• 申請（專利權）人: 天津奧維亞生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 暫無信息
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本發明公開了一種N端特異的人ZNF295多肽以及抗體的制備方法，屬于以抗體為特征的體外實驗用的生物制品。N端特異的人ZNF295多肽的氨基酸序列為：QSLFTNKENESQTV。抗入ZNF295多肽抗體按以下方法制備：(1)人ZNF295抗原表位分析；(2)人ZNF295 N端多肽合成；(3)合成多肽與載體蛋白交聯；(4)制備兔抗人ZNF295多肽抗體；(5)收集、分離得到含有抗體的血清，純化抗體，即得到抗人ZNF295多肽抗體。本發明制備的N端特異的抗人ZNF295合成多肽抗體效價高、親和力強、特異性好，可與天然人ZNF295發生特異性結合反應；制備成本低；純化后的抗體可以用于免疫印跡和免疫組化。該抗體為ZNF295蛋白的基礎研究，比如對ZNF295的特性、功能、表達譜和含量的分析，及其相關疾病的研究提供了一個重要的工具。

1.技術領域

本發明涉及一種多肽及其抗體制備方法，這種抗體主要用于天然蛋白抗原的檢測。

2.背景技術

1)ZNF295功能：Down綜合癥(Down Syndrome)，又稱21-三體綜合癥(21 trisomysyndrome)或先天愚型，是一種最常見的臨床遺傳代謝性疾病，在活產嬰兒中的發病率為0.12-0.16％。細胞遺傳學特征為第21號染色體呈三體征，其發生主要是由于生殖細胞在減速分裂形成配子時，或受精卵在有絲分裂時21號染色體發生不分離，使胚胎體細胞內存在一條額外的21號染色體。初步研究發現，ZNF295蛋白的過度表達被認為與這條額外的21號染色體有關，因此，對ZNF295蛋白的深入研究，對該病的發病機理，臨床分型，精準治療及預防有著重要的推動作用。(Gene.2013 Jan；10：125(2)-25)。

2)ZNF295抗體產品信息：經檢索，市場上有ZNF294蛋白的多克隆抗體，但是這些抗體的抗原表位跟我公司的抗原表位不同。

3)ZNF295抗體的應用：初步研究發現，ZNF295蛋白在Down綜合癥中的過度表達是這條額外21號染色體的作用結果。這就提示我們，該蛋白有可能在該病的發生，發展過程中，起著重要的作用，不久將來很可能成為一個潛在的具有基礎研究和臨床應用價值的疾病標志物，因此，研發與其靶蛋白對應的多肽及其特異性抗體，將對研究該蛋白及其在該病發生，發展過程中的作用，及臨床精準治療及預防，提供精確可靠的工具和材料，具有重要意義。

3.發明內容

本發明提供了一種ZNF295多肽，其序列為：QSLFTNKENESQTV。用此多肽制備的抗ZNF295抗體可以在免疫印跡(Western blot)分析中特異識別組織或細胞中的天然ZNF295蛋白。

抗ZNF295抗體是通過以下步驟獲得的：

步驟一：多肽序列的分析和設計：利用DNAstar軟件對ZNF295蛋白的氨基酸序列進行抗原表位分析，主要評估親水性，抗原性，表面可能性，柔性區等指數，再結合過去制備抗體的實際經驗，最終確定ZNF295蛋白56-69位14個氨基酸作為合成多肽氨基酸序列，序列為QSLFTNKENESQTV。

步驟二：多肽合成和交聯：采用ACT396全自動多通道多肽合成儀合成目的多肽，并采用質譜進行鑒定；為增強多肽的抗原性，將ZNF295多肽與載體蛋白KLH采用Sulfo-SMCC交聯法進行交聯。

步驟三：多肽免疫和抗血清制備：將交聯后的ZNF295-KLH與弗氏佐劑混合乳化，在新西蘭兔背部進行皮內注射免疫，并反復加強免疫，至取血檢測抗體效價達到標準時停止免疫。

步驟四：抗體純化：實驗兔抗體效價達到標準后，采用心臟取血，分離抗血清，采用Protein A純化全抗體后，進一步采用肽親和純化，得到目標抗體。

抗ZNF294抗體是通過以下步驟鑒定的：