[發明專利]雜交瘤細胞株及基于雜交瘤細胞株的抗CRH抗體N?D19及其檢測方面的應用

在審

• 申請號: 201611112449.2
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN107043752A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發明（設計）人: 陳鋒;劉英富;李光宗;霍景瑞;侯世科;樊毫軍
• 申請（專利權）人: 陳鋒;劉英富
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/26;G01N33/74;G01N33/577
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司12211
• 代理人: 丁曉玥

1.一種雜交瘤細胞株，于2016年4月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，分類命名為雜交瘤細胞，保藏編號為CCTCC NO.C2015216。

2.一種抗腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)的單克隆抗體N-D19，其特征在于：由權利要求1所述雜交瘤細胞株產生。

3.根據權利要求2所述的單克隆抗體N-D19，其特征在于：所述單克隆抗體N-D19能識別CRH的N端表位(CRHN)，CRH的N端表位序列為SEQ ID NO:1中所示序列。

4.權利要求2所述單克隆抗體N-D19的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S01：將CRHN蛋白與KLH偶聯，形成KLH-CRHN偶聯肽，作為免疫原；

S02：以KLH-CRHN偶聯肽與免疫佐劑混合，免疫BALB/C小鼠后，取小鼠脾細胞；

S03：將小鼠脾細胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細胞融合，獲得所述雜交瘤細胞，體內誘生或體外培養，經純化，即得。

5.根據權利要求2所述的抗CRH的單克隆抗體N-D19的應用，其特征在于：應用于制備檢測CRH方面的檢測工具或在制備檢測與CRH有關疾病的試劑方面的應用。

6.根據權利要求3所述的單克隆抗體N-D19的應用，其特征在于：所述與人CRH有關疾病為急性高原病。

7.一種檢測CRH的雙抗體夾心ELISA試劑盒，其特征在于：包括權利要求3所述的單克隆抗體N-D19；還包括單克隆抗體C-D17；

所述單克隆抗體C-D17是保藏編號為CCTCC NO.C2015215的雜交瘤細胞株產生，能識別CRH的C端表位，CRH的C端表位序列為SEQ ID NO:2中所示序列。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括預包被單克隆抗體N-D19的酶標板和HRP標記的單克隆抗體C-D17；或預包被單克隆抗體C-D17的酶標板和HRP標記的單克隆抗體N-D19。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括CRH標準品；標準品或樣品稀釋液：pH為7.4的PBS緩沖液；酶標抗體稀釋液：PBS和質量分數為1％BSA；洗滌液：0.02mol/L PBS和質量分數為0.05％吐溫20；顯色液：TMB顯色液；終止液：2mol/L H2SO4。

10.權利要求7-9任一項所述試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：向預包被的酶標板中加入待測樣品、HRP標記的單克隆抗體C-D17或N-D19，顯色液顯色，終止液終止，檢測OD₄₅₀。