[發(fā)明專利]基于納米銀催化銀沉積的電化學(xué)核酸適配體傳感器

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201611107280.1
• 申請日: 2016-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN108152342A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋偉;朱超云;賴慶菁
• 申請（專利權(quán)）人: 南京科技職業(yè)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了基于納米銀催化銀沉積的電化學(xué)核酸適配體傳感器，用于對PDGF?BB的測定。以酶標(biāo)板為分析平臺(tái)，印刷芯片電極為檢測裝置，構(gòu)建電化學(xué)核酸適配體傳感器。將生物素修飾的核酸適配體固定至鏈霉親和素包裹的酶標(biāo)板中，以巰基修飾的核酸適配體功能化的納米銀作為探針。通過三明治型的夾心反應(yīng)后，加入銀增強(qiáng)溶液，利用納米銀催化銀沉積反應(yīng)，在孔板中形成了大量的銀沉積物。隨著酸溶解生成的銀沉積物后，插入印刷芯片電極，采用方波陽極溶出伏安法對釋放出的銀離子進(jìn)行測定。銀的電化學(xué)溶出峰與PDGF?BB的濃度相關(guān)，從而實(shí)現(xiàn)對PDGF?BB的定量測定。分析方法對PDGF?BB的測定結(jié)果良好，線性范圍為3.12 ng mL^?1至200 ng mL^?1，檢測限為1.23 ng mL^?1，且特異性良好。本發(fā)明提供的電化學(xué)核酸適配體傳感器可用于臨床醫(yī)學(xué)中特異性、高靈敏的檢測生物標(biāo)志物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測和分析儀器技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于酶標(biāo)板和印刷芯片電極，利用納米銀催化銀沉積的反應(yīng)，構(gòu)建電化學(xué)核酸適配體傳感器對血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB）進(jìn)行測定。

背景技術(shù)

開發(fā)新的分析方法用于定性定量測定與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)，在醫(yī)學(xué)診斷、治療和研究領(lǐng)域內(nèi)至關(guān)重要。與抗體相比，核酸適配體具有化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)，合成簡單，易于修飾的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)適合于開發(fā)各種不同分析方法里的分子工具。因此，在研究者設(shè)計(jì)各種不同的生物分析方法里，核酸適配體成為了一種更為有效的選擇。生物傳感器是能夠提供定量或半定量信息分析信息的分析儀器，它使用一個(gè)生物識(shí)別元件并直接與傳導(dǎo)元件接觸，在醫(yī)療診斷中獲得了越來越多的關(guān)注。近年來，在生物傳感器的構(gòu)建中，核酸適配體被用做生物識(shí)別的元件，發(fā)展了多種不同的分析方法，例如熒光生物傳感器、比色法生物傳感器和電化學(xué)生物傳感器等。同其他生物傳感器相比較，電化學(xué)生物傳感器具有靈敏度高，儀器設(shè)備簡單和檢測成本低的固有特點(diǎn)。將電化學(xué)檢測的優(yōu)點(diǎn)和核酸適配體特異性的識(shí)別能力結(jié)合起來并應(yīng)用在傳感器中，已經(jīng)成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)。印刷芯片電極由于具有其他電極所沒有的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，具有成本低，靈敏度高、重現(xiàn)性好、可一次性使用的優(yōu)點(diǎn)，為醫(yī)學(xué)診斷提供一個(gè)嶄新的分析平臺(tái)。

當(dāng)前研究者們正致力于利用信號(hào)放大技術(shù)實(shí)現(xiàn)超靈敏，甚至單分子的生物檢測。隨著納米技術(shù)的發(fā)展，基于納米材料的信號(hào)放大技術(shù)有著檢測過程迅速，易于實(shí)現(xiàn)微型化的優(yōu)點(diǎn)，因此在實(shí)現(xiàn)高靈敏、高選擇性的現(xiàn)場或在線測定生物分子領(lǐng)域內(nèi)具有廣闊的前景。在各種納米材料標(biāo)記物中，納米銀顆粒因?yàn)楦菀籽趸蚨哂懈玫碾娀瘜W(xué)性活性，從而更適合作為檢測探針。目前基于銀的檢測方法主要被用于測定DNA，蛋白質(zhì)和細(xì)胞活素的分析。各種不同銀沉積方法被大量使用在超靈敏的電化學(xué)生物傳感器中，比如化學(xué)還原法、酶催化銀沉積法、電化學(xué)法、納米顆粒標(biāo)記催化銀增強(qiáng)法等。

PDGF-BB是血小板衍生生長因子三種異構(gòu)體中的一種重要的蛋白質(zhì)，通常在人惡性腫瘤中過表達(dá)，因此是一種關(guān)鍵的癌癥生物標(biāo)志物。由于PDGF-BB有兩個(gè)活性點(diǎn)位能夠和相應(yīng)的核酸適配體結(jié)合，因此多種電化學(xué)核酸適配體生物傳感器被開發(fā)用以靈敏的檢測PDGF-BB。酶標(biāo)板是由光學(xué)透明的聚苯乙烯制作的，用于ELISA分析方法，對抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用。除傳統(tǒng)的免疫方法以外，酶標(biāo)板也可成為核酸適配體的固定載體，對生物標(biāo)志物進(jìn)行定量分析。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)不足，提出了一種基于納米銀催化銀沉積的電化學(xué)核酸適配體傳感器，實(shí)現(xiàn)對PDGF-BB的測定。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：