[發明專利]一種豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法

有效

• 申請號: 201611105766.1
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN106771187B
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 劉蕾;申洪銀;郭玉廣;鄒桂榮;李金積;胡瀟;曹志
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，豬瘟病毒ELISA抗體為陰性的家兔注射豬瘟基因工程亞單位疫苗(293T?E2)后，免疫一段時間后再注射脾淋源豬瘟活疫苗，保護率達到100％以上。本發明方法，用家兔進行免疫攻毒和用豬進行免疫攻毒結果是一致的，可替代用豬進行免疫攻毒的檢驗方法，縮短了檢測周期，節約了檢測成本，方法可操作性強，結果易于判定，生物安全性高。

技術領域

本發明屬于疫苗檢測技術領域，具體涉及一種豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法。

背景技術

豬瘟(slassical swine fever，CFS)以出血和發熱為主要特征，呈急性或慢性經過，是一種對豬危害性極大的傳染病，被國際獸疫局列為A類動物傳染病。目前使用的弱毒疫苗主要是中國豬瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE疫苗和法國的Thireval疫苗。20世紀70年代后期，豬瘟的流行形式發生了很大變化。地區散發性流行及非典型豬瘟癥狀的發生，特別是近年來國內外應用單克隆抗體對C-株檢測時發現有不同的反應模式，豬瘟免疫屢屢失敗等，表明豬瘟病毒的抗原性可能存在著變異，從而有人對傳統弱毒疫苗提出了質疑。隨著傳代次數的增加和對不同細胞的適應性繁殖，疫苗毒株可能發生異質性或抗原漂移加之數十年來CSFV在大規模免疫接種壓力下可能出現抗原變異。

這些情況都表明，現有的傳統疫苗已不能適應新形勢的需要，研究和開發新型豬瘟疫苗機是大勢所趨。分子生物學技術的興起和發展，為新型豬瘟疫苗的研究和開發奠定了基礎?；蛉笔醵疽呙?、亞單位疫苗和活載體疫苗是目前研究的熱點。

豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗屬于滅活疫苗，由于采用靶動物(豬)進行免疫攻毒，存在檢測周期長(約51天)，需要進行強毒(豬瘟病毒石門系)攻擊檢驗，急需建立一種替代動物或其他的效力檢驗方法用于滅活疫苗的效力檢驗，以解決縮短檢測周期，節約檢測成本，提高生物安全等問題。

發明內容

本發所要解決的技術問題是針對現有技術存在的不足，而提供一種豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，可替代用豬進行免疫攻毒的效力檢驗，從而縮短檢測周期，并減少成本，從而彌補現有亞單位疫苗效力檢驗的空白。

為了實現上述技術目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的豬瘟基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，包括以下步驟：

1)取健康的易感家兔作為檢驗對象，按照體重、性別隨機分為對照組和免疫組，免疫組至少設有2個平行組；

2)對免疫組家兔進行注射，注射待檢測的豬瘟基因工程亞單位疫苗，而對照組的家兔不注射任何物質；注射疫苗的家兔和對照組的家兔按照正常飼養方式飼養；

3)步驟2)注射疫苗19日后，免疫組和對照組的家兔每日測溫一次；21日后，免疫組和對照組的家兔均注射脾淋源豬瘟活疫苗，注射疫苗后每6小時測溫一次，共測72小時；

4)根據步驟3)注射脾淋源豬瘟活疫苗前后家兔體溫的變化，判定豬瘟基因工程亞單位疫苗是否達到保護作用，家兔體溫變化不超過1℃時判定為達到保護作用。

優選的，步驟1)中，所述的易感家兔，為豬瘟病毒ELISA抗體為陰性的家兔。

優選的，步驟1)中，所述的易感家兔，體重為1.5-3.0kg。

優選的，步驟1)中，所述的對照組不設平行組；所述的免疫組設有平行組，每個平行組設立的家兔只數與對照組相同。

優選的，步驟2)中，所述的豬瘟基因工程亞單位疫苗為293T-E2疫苗。

本發明的方法在對豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗進行效力檢測時，可用家兔來替代豬進行免疫攻毒的效力檢驗，由于檢驗動物家兔易獲得，節約檢驗成本，且檢驗周期短(約24天)，不涉及用豬瘟強毒攻擊，生物安全性高。

具體實施方式