[發明專利]一種豬瘟基因工程亞單位疫苗效力的抗體檢驗方法

有效

• 申請號: 201611105695.5
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN106771186B
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 劉蕾;張恒;陶曉珊;鄒敏;孫健;王麗萍;趙同淵
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供了一種豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗、效力檢驗方法，取健康的易感家兔作為檢驗對象，分為對照組和免疫組；對免疫組家兔進行注射，注射豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗，而對照組的家兔不注射任何物質；注射疫苗21日后，對免疫組和對照組的家兔均進行心臟采血，心臟血分別經過離心后取上清液，分別檢測豬瘟ELSIA抗體，抗體至少4/5為陽性則證明豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗效力檢驗合格。本發明的豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，可替代用豬進行免疫攻毒的效力檢驗，由于檢驗動物家兔易獲得，節約檢驗成本，檢驗周期短，不涉及用豬瘟強毒攻擊，生物安全性高。

技術領域

本發明涉及一種豬瘟基因工程亞單位疫苗(293T-E2)效力的抗體檢驗方法，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

豬瘟(slassical swine fever，CFS)以出血和發熱為主要特征，呈急性或慢性經過，是一種對豬危害性極大的傳染病，被國際獸疫局列為A類動物傳染病。在世界許多國家和地區，傳統疫苗接種是控制豬瘟的重要手段。目前使用的弱毒疫苗主要是中國豬瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE疫苗和法國的Thireval疫苗。20世紀70年代后期，豬瘟的流行形式發生了很大變化。地區散發性流行及非典型豬瘟癥狀的發生，特別是近年來國內外應用單克隆抗體對C-株檢測時發現有不同的反應模式，豬瘟免疫屢屢失敗等，表明豬瘟病毒的抗原性可能存在著變異，從而使有人對傳統弱毒疫苗提出了質疑。隨著傳代次數的增加和對不同細胞的適應性繁殖，疫苗毒株可能發生異質性或抗原漂移加之數十年來CSFV在大規模免疫接種壓力下可能出現抗原變異。

這些情況都表明，現有的傳統疫苗已不能適應新形勢的需要，研究和開發新型豬瘟疫苗機是大勢所趨。分子生物學技術的興起和發展，為新型豬瘟疫苗的研究和開發奠定了基礎。基因缺失弱毒疫苗、亞單位疫苗和活載體疫苗是目前研究的熱點。

豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗屬于滅活疫苗，除采用靶動物(豬)進行免疫攻毒的效力檢驗方法外，目前還沒有可用的替代方法，由于采用靶動物(豬)進行免疫攻毒的方法檢測周期長(51日)，飼養和檢驗成本高，檢驗過程中涉及使用豬瘟強毒，為解決以上問題，急需建立可行的有效的實驗動物效力檢驗方法用于滅活疫苗的效力檢驗，能夠縮短檢測周期，節約檢測成本，提高生物安全。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗效力檢驗方法，可替代常規的用豬進行免疫攻毒的效力檢驗，從而彌補現有亞單位疫苗效力檢驗的空白。

本發明檢驗方法，包括如下的步驟：

1)取健康的易感家兔作為檢驗對象，按照體重、性別隨機分為對照組和免疫組，免疫組至少設有2個平行組；

所述的易感家兔，為豬瘟病毒ELISA抗體為陰性的家兔；

2)對免疫組家兔注射待檢測的豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗(293T-E2)，而對照組的家兔不注射；注射疫苗的家兔和對照組的家兔按照正常飼養方式飼養；

3)在步驟2)注射疫苗21日后，對免疫組和對照組的家兔均進行心臟采血，血液經過離心后取上清液，分別檢測豬瘟ELSIA抗體，抗體為陽性則證明豬瘟基因工程亞單位疫苗達到保護作用。

優選的，步驟1)中，所述的對照組不設平行組；所述的免疫組設有平行組，每個平行組設立的家兔只數與對照組相同。

優選的，步驟2)中，所述的豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗的注射方式為皮下靜脈注射，注射部位為家兔的頸部。

優選的，步驟2)中，所述的豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗的注射劑量為0.2ml/只。

優選的，步驟3)中，離心時的速度為7000r/min，離心時間為10分鐘。