[發明專利]一種基因組編輯載體、其組成的基因組編輯系統及應用

有效

• 申請號: 201611103233.X
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN108148853B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 田朝光;劉倩;高染染;李金根;孫文良;林良才;高婧芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12N15/113;C12R1/645
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯桂麗

1.一種基因組編輯載體，其特征在于，所述基因組編輯載體包括啟動sgRNA的編碼DNA轉錄的啟動子，所述啟動子為RNA聚合酶III型啟動子U6；

所述基因組編輯載體還包括所述RNA聚合酶III型啟動子U6調控的sgRNA轉錄的表達框；

所述基因組編輯載體還包括Cas9蛋白的表達框；

所述RNA聚合酶III型啟動子U6的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的編輯載體，其特征在于，所述RNA聚合酶III型啟動子為嗜熱毀絲霉RNA聚合酶III型啟動子U6。

3.根據權利要求1所述的編輯載體，其特征在于，所述sgRNA轉錄的表達框為U6p-amdS-sgRNA、U6p-cre1-sgRNA、U6p-res1-sgRNA、U6p-gh1-1-sgRNA或U6p-alp1-sgRNA中的任意一種或至少兩種的組合；

所述U6p-amdS-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述U6p-cre1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述U6p-res1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述U6p-gh1-1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述U6p-alp1-sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.根據權利要求1所述的編輯載體，其特征在于，所述Cas9蛋白的表達框包括Ptef1啟動子、Ptef1啟動子調控的Cas9蛋白和TrprC終止子。

5.根據權利要求4所述的編輯載體，其特征在于，所述Ptef1啟動子為嗜熱毀絲霉翻譯延伸因子TEF1A的啟動子。

6.根據權利要求4所述的編輯載體，其特征在于，所述Ptef1啟動子的核苷酸序列如SEQID NO.7所示。

7.根據權利要求4所述的編輯載體，其特征在于，所述Cas9蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.8所示，所述Cas9蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

8.根據權利要求4所述的編輯載體，其特征在于，所述Cas9蛋白的表達框還包括綠色熒光標記蛋白。

9.根據權利要求4所述的編輯載體，其特征在于，所述Cas9蛋白的表達框的核苷酸序列如SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。

10.一種基因組編輯的系統，其特征在于，所述系統包括如權利要求1-9中任一項所述的基因組編輯載體。

11.根據權利要求10所述的系統，其特征在于，所述系統還包括和同源供體DNA序列。

12.根據權利要求11所述的系統，其特征在于，所述同源供體DNA序列包括donor-cre1、donor-res1、donor-gh1-1或donor-alp1中的任意一種或至少兩種的組合；

所述donor-cre1的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

所述donor-res1的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

所述donor-gh1-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；

所述donor-alp1的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。

13.一種宿主細胞，其特征在于，包含有如權利要求1-9中任一項所述的基因組編輯的載體或如權利要求10-12任一項所述的基因組編輯的系統。

14.根據權利要求13所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為真菌細胞。