[發(fā)明專利]一種高硫酸化硫酸角質(zhì)素及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611102103.4
• 申請(qǐng)日: 2016-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108148145B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于廣利;李芹英;李國(guó)云;尚慶森;趙小亮;蔡超;郝杰杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)海洋大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;A61P37/02;A61P1/00
• 代理公司: 青島合創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

1.一種高硫酸化硫酸角質(zhì)素，其特征在于：所述高硫酸化硫酸角質(zhì)素來(lái)源于鯊魚軟骨，分子量為20～100kDa，所述高硫酸化硫酸角質(zhì)素由6位硫酸化半乳糖和6位硫酸化乙酰氨基葡萄糖以β-1,3和β-1,4糖苷鍵交替連接而成，其二硫酸化二糖含量為80～95％，非還原端為唾液酸化的三硫酸基取代硫酸角質(zhì)素四糖，唾液酸與半乳糖之間為α-2,3連接，其結(jié)構(gòu)式如下：

其中所述結(jié)構(gòu)式中R₁＝SO₃^-，R₂＝H或R₁＝H，R₂＝SO₃^-；

所述唾液酸化的三硫酸基取代KS四糖，其結(jié)構(gòu)如下所示：

其中所述結(jié)構(gòu)式中兩個(gè)取代基R₁和R₂其中之一為SO₃^-，另一取代基則為H。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高硫酸化硫酸角質(zhì)素，其特征在于：所述鯊魚軟骨為鯊魚的關(guān)節(jié)、肋骨、頭骨、椎骨、椎間盤或氣管部位的軟骨。

3.權(quán)利要求1所述的高硫酸化硫酸角質(zhì)素的制備方法，其特征在于它包括以下步驟：

(1)蛋白酶降解：將鯊魚軟骨粉碎后分散于酶解緩沖液中，然后加入木瓜蛋白酶，50～70℃搖床反應(yīng)，后煮沸使酶滅活；降溫后再加入胰蛋白酶，30～55℃搖床反應(yīng)，后煮沸使酶滅活，冷卻后離心去除不溶性雜質(zhì)；

(2)乙醇沉淀：向步驟(1)得到的溶液中加入乙醇，低溫放置12～24小時(shí)，離心后取沉淀，沉淀用蒸餾水復(fù)溶后透析，減壓濃縮、凍干后得到鯊魚軟骨粘多糖組分；

(3)陰離子交換樹(shù)脂分離：將步驟(2)所得鯊魚軟骨粘多糖組分用蒸餾水溶解，以氯化鈉水溶液為流動(dòng)相線性洗脫，經(jīng)陰離子交換樹(shù)脂分離純化，硫酸苯酚法檢測(cè)，蒸餾水透析后減壓濃縮、凍干，得到高純度硫酸角質(zhì)素；

或者軟骨素酶解分離：將步驟(2)所得鯊魚軟骨粘多糖組分用緩沖液溶解，加入軟骨素ABC酶，25～40℃搖床反應(yīng)4～6h后煮沸使酶滅活，離心后向上清液中加入乙醇，低溫放置12～24小時(shí)，離心收集沉淀，復(fù)溶于水后透析脫鹽、凍干，得到高純度硫酸角質(zhì)素；

所述步驟(3)中所述陰離子交換樹(shù)脂的填料為Q-Sepharose FF、DEAE-Sepharose FF、Capto-Q Sepharose FF、DEAE-Cellulose或Capto-DEAE Sepharose FF；

所述步驟(3)中軟骨素ABC酶的用量為300～600mU·g^-1。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高硫酸化硫酸角質(zhì)素的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中木瓜蛋白酶的用量為10～100U·g^-1，pH為7.0；所述胰蛋白酶的用量為0.1～10％，pH為7.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的高硫酸化硫酸角質(zhì)素的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的反應(yīng)時(shí)間均為8～12h。

6.權(quán)利要求1或2所述的高硫酸化硫酸角質(zhì)素在制備調(diào)節(jié)腸道微生物的制劑中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1或2所述的高硫酸化硫酸角質(zhì)素在制備增強(qiáng)免疫力的制劑中的應(yīng)用。