[發明專利]孕期脂多糖導致子代大鼠高血壓模型的建立方法

在審

• 申請號: 201611101163.4
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN106577509A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 孫同文;丁顯飛;萬有棟;孫謀;余言午
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司32252
• 代理人: 李小靜

技術領域

本發明涉及一種模型建立方法，具體地說是孕期脂多糖導致子代大鼠高血壓模型的建立方法，屬于生物醫學領域。

背景技術

原發性高血壓由基因和環境因素相互作用導致的疾病，其是心血管疾病發生的主要風險因素，并對人類的健康構成了重大威脅。目前，大量的研究表明，孕期影響胎兒的環境因素，在成年后高血壓，糖尿病及肥胖等疾病的發生發展中起著至關重要的作用。

長期暴露于低劑量脂多糖的人群易感染，酒精濫用及腸道紊亂，且已發現高劑量的脂多糖暴露可引起婦女細菌性陰道炎。脂多糖是革蘭氏陰性菌的細胞壁的一種毒性成分，常寄居在動物和人的消化道內，且其常用于構建細菌感染的實驗模型。大量研究表明，孕期脂多糖暴露可隨后引起高血壓，心肌纖維化，肥胖，異常睪丸發育，及阿爾茨海默氏病。

基于醫學研究的倫理要求，目前尚無法通過臨床試驗來研究孕期脂多糖導致子代大鼠高血壓疾病中的具體作用及其機制。因此，建立子代大鼠高血壓疾病模型，可用于研究原發性高血壓疾病的發生、發展機制及開發對抗藥物為目的的醫學基礎和臨床研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的不足，提供一種操作簡單方便、培育高效的孕期脂多糖導致子代大鼠高血壓模型的建立方法。

按照本發明提供的技術方案：孕期脂多糖導致子代大鼠高血壓模型的建立方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)、配制脂多糖溶液；

(2)、選取符合標準的孕鼠，分別在孕鼠孕期的第8、10、12天，采用腹腔注射方式注射1次步驟(1)配制好的脂多糖溶液，脂多糖的單次劑量不超過0.80mg/kg，不低于0.77mg/kg；

(3)、飼養注射了脂多糖的孕鼠及其繁殖的子代大鼠；

(4)、對步驟(3)獲得的子代大鼠，在其生長的6～16周期間，按2周1次的周期進行收縮壓測定，收縮壓達到131.5～136.7mm Hg的16周子代大鼠即為孕期脂多糖導致高血壓的子代大鼠。

作為本發明的進一步改進，所述脂多糖溶液要求現配現用，按每1mg脂多糖中加入0.9～1.1ml生理鹽水的比例進行配制，并充分混合搖勻。

作為本發明的進一步改進，所述脂多糖溶液的混合搖勻時間控制在20分鐘左右。

作為本發明的進一步改進，所述脂多糖與生理鹽水的配制比例為每1mg脂多糖中加入1ml生理鹽水。

作為本發明的進一步改進，所述步驟(2)中符合標準的孕鼠是指7～8周齡的體重為250～270g的SD成年大鼠。

作為本發明的進一步改進，所述步驟(2)中，選取孕鼠的腹部臍與髂前上棘連接線外1/3點為注射部位。

作為本發明的進一步改進，所述步驟(2)中，注射脂多糖的單次劑量為0.79mg/kg。

作為本發明的進一步改進，所述步驟(3)中，飼養注射了脂多糖的孕鼠及其繁殖的子代大鼠的方法為：所有的孕鼠飼養于標準動物房，室內恒溫24℃，12小時黑夜循環，幼鼠經母乳喂養4周后分籠，每籠4只4周子鼠。

作為本發明的進一步改進，所述步驟(4)中測定收縮壓的方法為尾套法。

作為本發明的進一步改進，所述尾套法具體操作是：測前將子代大鼠置于33～35℃的溫熱室內13～17分鐘，以引起尾血管擴張；然后將子代大鼠放置在限制件中，并將具有氣動脈沖傳感器的袖帶附接到大鼠尾部，每只子代大鼠至少測量3次收縮壓，最終結果取其平均值。

本發明與現有技術相比，具有如下優點：本發明操作簡單方便，能夠準確高效地培育出孕期脂多糖導致高血壓的子代大鼠，從而為高血壓疾病的致病機制、診斷、治療以及預防的研究提供一種新的途徑和可能。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。

藥品試劑：脂多糖(LPS)，生理鹽水。

試驗動物：7～8周齡的體重為250～270g的孕1天的SD成年大鼠【購自北京維通利華公司】。

主要儀器：一次性5、10ml無菌注射器；一次性3ml無菌吸管；大鼠無創血壓儀【BP 2010A，日本軟龍公司】；大鼠操作臺。

實施例1：【實驗組1】

(1)、配制脂多糖溶液：現配現用，按每1mg脂多糖中加入1ml生理鹽水的比例進行配制，并充分混合搖勻，混合搖勻的時間控制在20分鐘左右，配好之后備用；如果脂多糖溶液本次未使用完，不建議下次繼續使用。