[發明專利]用于快速檢測ABCB1基因C3435T多態性的核酸、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201611100812.9
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN106755352B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 楊惠娟;鄒芳;段衛濤;趙平鋒
• 申請（專利權）人: 武漢海吉力生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 程殿軍;張瑾

本發明公開了用于快速檢測ABCB1基因C3435T多態性的核酸、試劑盒及方法，該核酸包括檢測引物和檢測探針，其中，所述檢測引物包括野生型下游引物、突變型下游引物和公用上游引物，所述野生型下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1，所述突變型下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述公用上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述檢測探針的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。本發明提供的實時熒光定量PCR快速檢測ABCB1基因C3435T多態性的檢測試劑盒和方法，使用方便，操作簡便，自動化程度高，大大簡化了操作過程，并減少了在操作過程的污染，檢測效果好，具有高靈敏度、高特異性、高準確度、高精確度的特點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用熒光定量PCR技術快速檢測ABCB1基因C3435T多態性的核酸、試劑盒及方法。

背景技術

冠狀動脈性心臟病是我國常見的心血管疾病之一。經皮冠狀動脈內支架介入治療(PCI)作為心肌血流重建術中創傷最小的一種方法，能使冠心病人群的長期預后得到較大改善，目前已成為治療冠心病的重要手段。然而PCI術后易在支架植入處形成血栓，造成不同程度的阻塞，從而導致不穩定心絞痛、急性心肌梗死、甚至猝死等一系列急性并發癥。即使未植入支架的冠狀動脈在其他病變部位也經常會因粥樣硬化的進展引發血栓不良事件。

為預防血栓的形成，在急性冠狀綜合征(ACS)和PCI術后的病人中目前普遍采用氯吡格雷和阿司匹林雙聯用的標準抗血小板治療，以降低心血管事件(死亡、中風、再發心梗)的發生率。然而由于個體對藥物的反應存在差異，仍有一部分患者在服用了標準劑量的氯吡格雷之后，仍然發生血栓栓塞等不良的心血管事件，即氯吡格雷抵抗(CR)。

CR的發生是多種因素共同作用的結果，包括遺傳變異、與其他藥物的相互作用、藥物劑量、個體依從性、血小板更新速度、旁路代謝等。氯吡格雷是一種前體藥物，必需經過腸內吸收、肝臟代謝才能轉變成有活性的藥物成分，從而發揮其抗血小板聚集的作用。ABCB1基因編碼腸道上皮細胞產生的P糖蛋白(P-gp)，P-gp可以直接影響氯吡格雷從消化道進入血液，不同個體間P-gp的差異可能會引起氯吡格雷在不同個體間治療效果的差異。

ABCB1基因在人類7號染色體上，包含28個外顯子，編碼一個長度為170KDa的跨膜糖蛋白P-gp。ABCB1基因的C3435T多態性位點，可通過密碼子的改變而影響蛋白質的折疊結構，使其對調節分子或底物的親和力發生變化，從而對藥物的代謝產生影響。對氯吡格雷治療患者的研究發現，ABCB1基因C3435T多態性位點的T等位基因攜帶者，與主要不良心血管事件(MACE)的發生風險密切相關。同樣地，在Tabasson simon的研究中，氯吡格雷的血清濃度和有活性的代謝產物，在該位點的TT基因攜帶人群中減少。因此通過對ABCB1基因C3435T多態性位點的檢測，將更好地為心血管病人提供個體化的抗血小板治療方案，對預防不良心血管事件具有積極意義。

可用于ABCB1基因多態性檢測的技術方法主要有測序法、液相芯片法、溶解曲線法等。DNA測序法雖然是基因分型的金標準，但檢測靈敏度低、樣品易污染，出現假陽性，實驗操作復雜，費時、檢測效率低。而熔解曲線法雖然快速簡便，但假陽性率高。液相芯片法操作過程復雜，且容易污染，假陽性率高。

發明內容

為克服現有技術檢測能力的不足，本發明的目的是提供一組用于快速檢測ABCB1基因C3435T多態性的核酸。本發明的另一個目的是提供一種用于快速檢測ABCB1基因C3435T多態性的試劑盒及其檢測方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：