[發明專利]多價肺炎球菌多糖結合疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 201611099891.6
• 申請日: 2016-12-02
• 公開（公告）號: CN108144056A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 艾智武;張凡;吳克;劉昊智;史晉;陳煜;袁軍;程超
• 申請（專利權）人: 武漢博沃生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/116;A61K39/09;A61P31/04;C08B37/00
• 代理公司: 上海市海華永泰律師事務所 31302
• 代理人: 包文超

1.一種具有免疫原性的多糖-蛋白質綴合物，其特征在于由來自于肺炎鏈球菌的多糖與蛋白質組成綴合物，所述的多糖屬于血清型為1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、16F、17F、18C、19A、19F、20、20F、23A、23F和33F的莢膜多糖。

2.根據權利要求1所述的具有免疫原性的多糖-蛋白質綴合物，其特征在于所述的蛋白質為CRM197蛋白。

3.一種制取權利要求1所述的具有免疫原性的多糖-蛋白質綴合物的方法，其特征在于：

將滅活的肺炎球菌離心，收集上清液，經超濾濃縮，加入十六烷基三甲基溴化銨，離心收集上清液；經離心的上清液經過幾次乙醇沉淀后，離心收集沉淀即為粗制多糖；

將粗制多糖溶于水，經超濾膜濃縮透析，除菌過濾后上羥基磷灰石柱層析柱，分別收集各種組分，經超濾膜濃縮透析，透析收集液中加入乙醇，離心收集沉淀，即得精制的莢膜多糖；

將26種經純化的血清型肺炎鏈球菌莢膜多糖或其各自降解的多糖分別制成濃度為5～10mg/ml的多糖溶液，然后向多糖溶液中分別加入50mg/ml～100mg/ml激活劑，后用0.2mol/L的三乙胺或氫氧化鈉調整pH值，活化1分鐘～5分鐘后加入載體蛋白，再次用0.2mol/L的三乙胺或氫氧化鈉調整pH值至8.90～9.60，室溫下反應30分鐘～60分鐘，加入終止劑后再反應16小時～24小時，即得結合物原液。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述的各種組分為流穿液和1～3個柱體積的淋洗液。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于激活劑選自于1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸、溴化氰和高碘酸鈉之一種或幾種。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述的激活劑用量為多糖總量的50w/w％～100w/w％。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述的多糖與CRM197蛋白相互作用的pH為8.70～9.70。

8.根據權利要求1所述的具有免疫原性的多糖-蛋白質綴合物在制備肺炎鏈球菌結合疫苗中的應用。

9.一種肺炎鏈球菌結合疫苗，其特征在于包括權利要求1所述的具有免疫原性的多糖-蛋白質綴合物。