[發明專利]含有連烯酰胺基團的化合物在制備蛋白質抑制劑、蛋白質交聯劑或蛋白質標記物中的應用

在審

• 申請號: 201611097411.2
• 申請日: 2016-12-02
• 公開（公告）號: CN108148006A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 雷曉光;李強;董婷
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C07D239/94
• 分類號: C07D239/94;A61K31/517;A61P35/00;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明涉及含有連烯酰胺基團的化合物在制備蛋白質抑制劑、蛋白質交聯劑或蛋白質標記物中的應用。本發明進一步涉及一種EGFR蛋白共價抑制劑及其制備方法，所述EGFR蛋白共價抑制劑具有優異的抗腫瘤活性。本發明通過應用含有連烯酰胺基團的化合物，可以選擇性地與半胱氨酸的巰基反應而形成共價鍵連接，連烯酰胺基團的特異性為今后選擇性標記半胱氨酸提供一個強有力的工具。

技術領域

本發明涉及生化技術領域，具體涉及含有連烯酰胺基團的化合物在制備蛋白質抑制劑、蛋白質交聯劑或蛋白質標記物中的應用。

背景技術

共價抑制劑也稱為不可逆抑制劑，它是通過與靶標蛋白形成不可逆的共價鍵而行使其生物學功能的一類抑制劑。在過去的幾十年里，共價藥物已經被批準作為多種臨床病癥的有效治療手段，并對人類的健康做出巨大貢獻。舉世矚目的共價藥物包括阿司匹林(aspirin)，氯吡格雷(clopidogrel)，蘭索拉唑(lansoprazole)和埃索美拉唑(esomeprazole)。正是由于這些共價藥物歷史性的成功以及共價抑制劑存在一些潛在的優勢，包括有更好的生物活性和特異性、可以延長作用時間、適合理性的設計、針對由于結合口袋突變而產生耐藥性的藥物可以進行重新改造，近些年來開發不可逆的共價抑制劑受到了科學家們越來越多的關注。最為經典的實例是EGFR抑制劑的開發：從第一代非共價抑制劑埃羅替尼(erlotinib)到第二代共價抑制劑阿法替尼(afatinib)，接著第三代共價抑制劑的問世WZ4002。

目前最常用的開發共價抑制劑的策略是在已經對靶標具有亞微摩爾結合親和力的非共價抑制劑中引入親電導彈頭(electrophilic warheads)反應官能團。由于這樣的親電導彈頭需要滿足很多嚴格的條件，包括選擇性的與靶標蛋白反應、在生理條件下保持穩定，并且能夠比較容易的引入到抑制劑中，到目前為止廣泛應用的含有親電導彈頭的化合物還沒有很多。邁克爾加成反應是構建共價連接最常用的反應，反應官能團包括丙烯酰胺，烯基砜和醌類；另一類常用的化學反應是與α-鹵代酮、磺酰氟和環氧類進行親核取代或加成反應。目前常見的親電導彈頭如圖1所示。然而大多數親電導彈頭都或多或少存在一些缺陷，例如α-鹵代酮和馬來酰亞胺會與賴氨酸和組氨酸反應而影響選擇性，丙烯酰胺與半胱氨酸的反應速率較慢。

因此，開發一類全新的含有親電導彈頭的化合物應用于蛋白質抑制劑、交聯劑或標記物的開發是一項具有重要意義的工作。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷，提供含有連烯酰胺(也稱聯稀酰胺)基團的化合物在制備蛋白質抑制劑、蛋白質交聯劑或蛋白質標記物中的應用。

在本發明提供的技術方案中，所述蛋白質抑制劑、蛋白質交聯劑或蛋白質標記物通過所述連烯酰胺基團與靶標蛋白質結合。

為了確保所述化合物的實用性以及與連烯酰胺基團結合的牢固性，本發明所述靶標蛋白質含有半胱氨酸，并通過所述半胱氨酸的巰基與所述連烯酰胺基團反應形成共價鍵。

本發明基于連烯酰胺具有特異性且高效的與半胱氨酸反應的特性，所述含有連烯酰胺基團的化合物還在制備蛋白質交聯劑或蛋白質標記物中具有應用價值。

具體而言，所述含有連烯酰胺基團的化合物可用于研究蛋白-蛋白相互作用以及蛋白質結構的化學交聯劑，可以是同型雙官能團交聯劑(Homobifunctional cross-linker)，也可以是異型雙官能團交聯劑(Heterobifunctional cross-linker)，如圖2所示。

所述含有連烯酰胺基團的化合物還可以用于制備蛋白質標記物。所述蛋白質標記物可以是藥物化合物，與抗體蛋白作用形成抗體-藥物復合體(Antibody-Drug Conjugate)(如圖3所示)；可以是熒光標記物，與蛋白質作用形成熒光蛋白(Fluorescent-Protein)(如圖4所示)；也可以是針對性用于半胱氨酸蛋白質組學研究的標記物(如圖5所示)。