[發明專利]一種玫煙色棒束孢的發酵培養方法

有效

• 申請號: 201611096775.9
• 申請日: 2016-12-02
• 公開（公告）號: CN106591146B
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 張宏宇;劉亞茹;王珊珊
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

本發明公開了一種玫煙色棒束孢的發酵培養方法，它包括液體發酵和固體發酵兩個階段，液體培養基含碳源為10?30g/L，含氮源為5?25g/L，含微量元素為50?250mg/L，含基礎鹽為0.5?1.5g/L，pH值為4?8；固體培養基為玉米粉、大米、花生餅粉、麥麩、豆粕。本發明生產玫煙色棒束孢的孢子產量、純度和活孢率都非常高，全部發酵培養周期在20天左右，具有生產周期短、成本低、效率高等優點，適用于玫煙色棒束孢的大規模生產。

技術領域

本發明屬于微生物發酵領域，具體涉及一種玫煙色棒束孢的發酵培養方法。

背景技術

玫煙色棒束孢(Isaria fumosaroseus)是一類廣泛侵染多種昆蟲的病原真菌，對柑橘木虱有很強的侵染作用，是柑橘木虱生物防治的優良菌種。玫煙色棒束孢的經濟、快速、大規模生產是其大量用于生物防治實踐的前提，單獨使用液體發酵產生的繁殖體不耐儲藏，目前玫煙色棒束孢發酵的方法較復雜，成本較高，培養過程中很容易出現雜菌污染現象。因此，研發新的高效、低成本大規模化生產培養基及操作簡單、不易污染的培養方法，是玫煙色棒束孢發酵生產的關鍵問題。

發明內容

本發明涉及一種對柑橘木虱高效的病原真菌玫煙色棒束孢(Isariafumosaroseus)的液體-固體發酵培養基及其培養方法。

本發明提供的發酵培養方法包括以下步驟：

1)液體發酵階段：以100ml液體培養基計，接種玫煙色棒束孢的孢子懸浮液1-8ml，于20-29℃，轉速100-200r/min條件下培養1-3天，得菌絲液；

2)固體發酵階段：將菌絲液接種于固體培養基中，菌絲液的體積占固體培養基重量的4-12％，置于15-35℃下培養6-18天后收獲，

所述液體培養基含碳源為10-30g/L，含氮源為5-25g/L，含微量元素為50-250mg/L，含基礎鹽為0.5-1.5g/L，pH值為4-8；

所述固體培養基為玉米粉、大米、花生餅粉、麥麩、豆粕中的一種或一種以上任意組合，加水至含水量為40-80％，pH值為4-8。

優選地，所述碳源為蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、玉米粉浸出液和麥麩浸出液中的一種或一種以上任意組合。

優選地，所含氮源為蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、豆粕粉、(NH₄)₂SO₄、NH₄Cl中的一種或一種以上任意組合。

優選地，所述微量元素為鎂鹽、銅鹽、鋅鹽、鐵鹽中的一種或一種以上任意組合。

本發明的有益效果是：

本發明采用液體-固體雙相發酵方法生產玫煙色棒束孢的分生孢子，孢子產量、純度和活孢率都非常高，全部發酵培養周期在20天左右，具有生產周期短、成本低、效率高等優點，適用于玫煙色棒束孢的大規模生產。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明進一步詳細說明。

實施例1

1)液體發酵階段：以100ml液體培養基計，接種玫煙色棒束孢的孢子懸浮液3.6ml(每ml含1.0×10⁷個孢子)，于26℃，轉速125r/min條件下培養3天，得菌絲液；

2)固體發酵階段：將菌絲液接種于固體培養基中，菌絲液的體積(ml)占固體培養基重量(g)的10％，置于25℃培養15天后收獲。