[發(fā)明專(zhuān)利]一種粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611095921.6
• 申請(qǐng)日: 2016-12-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106755272B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 隋志偉;王晶;劉曉夏;薛蕾
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/06
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/06;C12R1/43
• 代理公司: 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

本發(fā)明建立了一種粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法。本發(fā)明建立了粘質(zhì)沙雷氏菌細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)平板計(jì)數(shù)方法中上樣體積的優(yōu)化，找到了最適于粘質(zhì)沙雷氏菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上均勻分布的上樣體積，保證了最終平板計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性；本發(fā)明還建立了適用于粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算公式。通過(guò)對(duì)建立的定量檢測(cè)方法和檢測(cè)結(jié)果計(jì)算公式中各參數(shù)進(jìn)行分析，本發(fā)明還提供了一種粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)的不確定度評(píng)定方法。粘質(zhì)沙雷氏菌是一種人員生物防護(hù)裝備防護(hù)性能評(píng)價(jià)指示菌，對(duì)其準(zhǔn)確定量檢測(cè)才能保證評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性和可比性。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種人員生物防護(hù)裝備防護(hù)性能評(píng)價(jià)指示菌的檢測(cè)，具體涉及建立一種準(zhǔn)確的粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法。本發(fā)明還涉及建立一種粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)的不確定度評(píng)定方法。

背景技術(shù)：

生物安全柜、生物防護(hù)服、生物防護(hù)口罩、醫(yī)用外科口罩是常見(jiàn)的生物防護(hù)裝備，為了保障操作人員的安全，需要對(duì)這些裝備的微生物防護(hù)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)因其培養(yǎng)周期短、霧化和沖擊耐受性好、易消毒處理等優(yōu)點(diǎn)，被公認(rèn)為生物防護(hù)評(píng)價(jià)的指示菌。因此，該菌定量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性對(duì)上述生物防護(hù)裝備防護(hù)性能評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性起直接影響作用。

然而，目前對(duì)于粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法的研究還很少，因此非常有必要建立一種準(zhǔn)確可靠的粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法和不確定度評(píng)定方法。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的第一目的是提供一種重復(fù)性和準(zhǔn)確性好的粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法。

本發(fā)明的第二目的是提供一種粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)的不確定度評(píng)定方法。

建立粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法，要解決的主要技術(shù)問(wèn)題有兩個(gè)：

一是采用何種計(jì)算公式，使定量結(jié)果最為準(zhǔn)確；

二是待測(cè)樣品的粘質(zhì)沙雷氏菌細(xì)菌培養(yǎng)方法，特別是細(xì)菌平板計(jì)數(shù)中的上樣體積，對(duì)于粘質(zhì)沙雷氏菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的均勻分布和最終平板計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性很關(guān)鍵。

本發(fā)明經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，給出了解決兩個(gè)問(wèn)題的方案：一種粘質(zhì)沙雷氏菌定量檢測(cè)方法，其特征是：采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板涂布法培養(yǎng)后選取粘質(zhì)沙雷氏菌菌落，計(jì)數(shù)典型菌落數(shù)，并記錄稀釋因子，按公式①計(jì)算，得到粘質(zhì)沙雷氏菌活菌濃度的結(jié)果：

式中，

C為粘質(zhì)沙雷氏菌活菌濃度，CFU/mL；

N為平板上粘質(zhì)沙雷氏菌典型菌落的總數(shù)，CFU；

d為稀釋因子，無(wú)量綱；

v為平板上粘質(zhì)沙雷氏菌勻液的接種體積，mL。

用于計(jì)數(shù)的平板，選擇有典型特征的粘質(zhì)沙雷氏菌菌落，且菌落數(shù)在15CFU～150CFU之間的平板，計(jì)數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落數(shù)；菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-forming units，CFU)表示，定量檢測(cè)結(jié)果C以活菌濃度(CFU/mL)表示。

所述有典型特征的粘質(zhì)沙雷氏菌菌落特征是：凸起，中心不透明，邊緣不規(guī)則，產(chǎn)生紅色色素。

在上述方法中，用于平板計(jì)數(shù)的待測(cè)粘質(zhì)沙雷氏菌的培養(yǎng)方法，特征是：

1)將待測(cè)粘質(zhì)沙雷氏菌菌株樣品中加入無(wú)菌的磷酸鹽緩沖液作為稀釋液進(jìn)行復(fù)水溶解，然后再進(jìn)行10倍系列稀釋?zhuān)玫讲煌♂尪鹊臉悠穭蛞海?/p>

實(shí)際檢測(cè)生物安全柜和生物防護(hù)服等時(shí)，樣品為直接取樣的采集液。

2)選取上述1～5個(gè)稀釋度的樣品勻液接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，每個(gè)稀釋度的樣品勻液在平板的上樣體積是0.05～1mL；優(yōu)選的上樣體積是0.2mL；

(3)將平板置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。