[發(fā)明專利]一種具有抗腫瘤功能的免疫細(xì)胞及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611095758.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN106754723B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈萍萍;牛志遠(yuǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;A61K35/17;A61K35/15;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基因改造過(guò)的對(duì)惡性實(shí)體瘤具有治療作用的免疫細(xì)胞及其應(yīng)用，本發(fā)明提供的免疫細(xì)胞是特定的通過(guò)基因改造使之過(guò)表達(dá)脂代謝相關(guān)基因的免疫細(xì)胞；所述免疫細(xì)胞抑制腫瘤生長(zhǎng)的能力是通過(guò)在腫瘤微環(huán)境中降低免疫細(xì)胞本身脂滴的積累，降低促腫瘤基因/蛋白表達(dá)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的吞噬能力、抗原呈遞能力及腫瘤殺傷能力來(lái)實(shí)現(xiàn)的：所述免疫細(xì)胞為離體NKT細(xì)胞、DC細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞或T細(xì)胞。相關(guān)代謝調(diào)控基因的過(guò)表達(dá)使免疫細(xì)胞抗腫瘤能力顯著增強(qiáng)，相較目前受到強(qiáng)烈關(guān)注的嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法(CAR?T)，毒副作用低且不會(huì)引起細(xì)胞因子風(fēng)暴，滿足臨床需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基因改造過(guò)的具有抗腫瘤功能的免疫細(xì)胞及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤一直以來(lái)都是困擾全世界的重大疾病，嚴(yán)重危害人類健康。因此，尋找有效的腫瘤治療方法，徹底攻克腫瘤是世界醫(yī)學(xué)界的重要研究課題。目前，傳統(tǒng)的三大主要治療手段即手術(shù)治療、化療、放療，這三大主要治療手段雖然是全球腫瘤治療的基本手段，但是其治療效果非常有限。

最近腫瘤的細(xì)胞過(guò)繼免疫療法正在全世界興起，為腫瘤患者帶來(lái)了曙光。目前腫瘤過(guò)繼免疫療法所用的細(xì)胞主要是單核細(xì)胞、T細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞，如淋巴因子IL-2激活的T細(xì)胞或單核細(xì)胞；用腫瘤抗原(蛋白或多肽)處理激活的樹突狀細(xì)胞以及目前受到強(qiáng)烈關(guān)注的嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T)，即使T細(xì)胞表達(dá)可識(shí)別并結(jié)合腫瘤抗原的受體，擴(kuò)增后回輸給腫瘤患者來(lái)達(dá)到治療的目的。但是這些方法存在的問(wèn)題也正在被研究者發(fā)現(xiàn)，例如CAR-T治療引起的細(xì)胞因子釋放綜合征等。

而通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的代謝激活其抗腫瘤功能的研究是抗腫瘤免疫研究的一個(gè)全新領(lǐng)域，相關(guān)的研究報(bào)道非常少并集中在腫瘤微環(huán)境中的樹突狀細(xì)胞和T細(xì)胞。如2010年，Herber DL等在Nature Medicine雜志上報(bào)道腫瘤相關(guān)樹突狀細(xì)胞(TADCs)通過(guò)上調(diào)清道夫受體A從胞外攝取脂類，胞內(nèi)脂質(zhì)堆積直接導(dǎo)致樹突狀細(xì)胞抗原呈遞及激活T細(xì)胞的能力缺失，運(yùn)用乙酰-CoA羧化酶的小分子抑制劑干預(yù)脂質(zhì)堆積可以恢復(fù)TADCs的抗腫瘤功能；2015年，Cubillos-Ruiz JR，Silberman PC等人在Cell雜志上報(bào)道腫瘤微環(huán)境中樹突狀細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激現(xiàn)象，導(dǎo)致XBP1的激活以及樹突狀細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累，從而使樹突狀細(xì)胞抗原呈遞能力下降，運(yùn)用可以沉默XBP1的納米顆粒藥物可以減少樹突狀細(xì)胞內(nèi)脂滴的積累并增強(qiáng)其抗腫瘤能力；2015年，Ho PC，Bihuniak JD等人在Cell雜志上報(bào)道通過(guò)過(guò)表達(dá)磷酸烯醇丙酮酸羧基激酶1(PCK1)來(lái)增加T細(xì)胞內(nèi)的磷酸烯醇丙酮酸(PEP)，可以改善T細(xì)胞耗竭，通過(guò)過(guò)繼T細(xì)胞療法，即向小鼠體內(nèi)回輸過(guò)表達(dá)PCK1的T細(xì)胞，可以達(dá)到很好的抗腫瘤效果；2016年Kumar V和Cheng PY等人在Immunity雜志上報(bào)道，在缺氧環(huán)境誘導(dǎo)下，浸潤(rùn)到腫瘤組織中的MDSC會(huì)上調(diào)唾液酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(sialin)從而增加MDSC中唾液酸(sialic acid)的濃度并促使唾液酸與細(xì)胞表面CD45蛋白酪氨酸磷酸酶(CD45PTP)的結(jié)合并激活CD45PTP，進(jìn)而抑制了STAT3的活性，STAT3活性的抑制會(huì)促進(jìn)MDSC向TAMs的分化，從而形成促腫瘤的微環(huán)境。而使用唾液酸酶來(lái)水解掉MDSC中的唾液酸可以抑制MDSC向TAMs的分化；2016年Yang W，Bai YB等在Nature雜志上報(bào)道“代謝檢查點(diǎn)”可以調(diào)控T細(xì)胞的抗腫瘤活性，鑒定了腫瘤免疫治療的新靶點(diǎn)—膽固醇酯化酶ACAT1并開發(fā)了相應(yīng)的小分子藥物前體。報(bào)道稱通過(guò)調(diào)控T細(xì)胞的“代謝檢查點(diǎn)”可改變其代謝狀態(tài)，使其獲得更強(qiáng)的抗腫瘤功能。科研人員發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞代謝通路中的膽固醇酯化酶ACAT1是一個(gè)很好的調(diào)控靶點(diǎn)，抑制ACAT1的活性可以大大提高CD8+T細(xì)胞(又名殺傷性T細(xì)胞)的抗腫瘤功能。因?yàn)锳CAT1被抑制后，CD8+T細(xì)胞膜上的游離膽固醇水平提高，從而讓T細(xì)胞腫瘤抗原免疫應(yīng)答變得更加高效。同時(shí)，科研人員還利用ACAT1的小分子抑制劑avasimibe在小鼠模型中治療腫瘤，發(fā)現(xiàn)該抑制劑具有很好的抗腫瘤效應(yīng)；并且avasimibe與現(xiàn)有的腫瘤免疫治療臨床藥物anti-PD-1聯(lián)用后效果更佳。該項(xiàng)研究開辟腫瘤免疫治療研究的一個(gè)全新領(lǐng)域，證明細(xì)胞代謝對(duì)腫瘤免疫應(yīng)答起到了關(guān)鍵作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)ACAT1這一新的藥物靶點(diǎn)，揭示ACAT1小分子抑制劑的應(yīng)用前景，為腫瘤免疫治療提供了新思路與新方法。