[發明專利]促進CIK細胞增殖分化的人參多糖、培養基、培養方法和應用

有效

• 申請號: 201611094578.3
• 申請日: 2016-12-02
• 公開（公告）號: CN106635986B
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 陳春;胡華軍;楊連陽;謝昕
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C08B37/00;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

本發明涉及一種能促進CIK細胞增殖分化的人參多糖、培養基、培養方法和應用。所述人參多糖是由人參制備而成。所述制備方法包括以下步驟：人參加水煎煮，過濾濃縮，冷藏靜置，離心收集沉淀，干燥后重復水煮醇沉、冷藏離心，重復凍融離心后，減壓濃縮干燥得到人參多糖。人參多糖提取液對CIK細胞有明顯的誘導增殖作用，CD3和CD56雙陽性明顯提高且誘導培養后的CIK細胞對腫瘤生長有較強的殺傷作用，具有臨床應用的潛力。

技術領域

本發明涉及中藥應用技術領域，具體的說是涉及提取中藥材中的有效成分，并在提高CIK細胞增殖速率、CD3和CD56雙陽性和對腫瘤殺傷力的臨床的應用。

背景技術

細胞過繼免疫治療是目前的研究熱點，并已進入臨床試驗，它是將體外激活的自體或異體免疫效應細胞輸注給患者，殺滅患者體內的腫瘤細胞，并在此基礎上修復、完善機體免疫系統的生物治療方法。CIK細胞(cytokine-induced-killer cells)是一群在體外經過多種細胞因子共同誘導，能夠同時表達兩種膜蛋白分子即CD3和CD56的異質細胞，它不僅具有自然殺傷細胞的非主要組織相容性復合物(major histocompatibility complex,MHC)限制性殺瘤特點，還具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性，具有重要的免疫治療臨床應用價值。因此，CIK細胞的體外大量增殖，即提高其體外增殖速率和對腫瘤細胞的殺傷力，是大規模使用CIK 細胞免疫治療的關鍵所在。多糖作為一種免疫調節和促進劑對巨噬細胞、T/B淋巴細胞、自然殺傷細胞(NK)和淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)的功能都有調節作用，本發明應用人參多糖對CIK細胞的誘導和調節方面的研究有助于其更好地應用于臨床。

發明內容

利用人參多糖提取液有機地結合CIK細胞免疫治療在腫瘤治療中的強大優勢，建立人參多糖促進免疫細胞的大量增殖和提高殺傷力的工藝體系，從而間接改善腫瘤患者的生活質量，延長生存期。本發明目的在于提供最優人參多糖提取液濃度在提高CIK細胞增殖速率、CD3和CD56雙陽性和對腫瘤殺傷力方面的應用。

本發明提供了一種促進CIK細胞增殖分化的人參多糖，所述人參多糖是采用水提醇沉法從人參中提取得到。

本發明提供了一種CIK細胞培養基，包括基礎培養基和人參多糖。

進一步地，所述人參多糖在培養基中的含量為3～300μg/mL。優選的，所述人參多糖在培養基中的含量為30μg/mL。

進一步地，所述基礎培養基選自RPM1640培養基、DMEM培養基或MEM 培養基。

進一步地，所述培養基中還包括IFN-γ和CD3單抗。

本發明提供了一種CIK細胞培養的方法，包括以下步驟：

(1)制備CIK細胞的出發細胞；

(2)配制含有人參多糖的培養基，并添加入步驟(1)中的出發細胞，經培養獲得CIK細胞。

進一步地，所述人參多糖在培養基中的含量為3～300μg/mL。優選的，所述人參多糖在培養基中的含量為30μg/mL。

進一步地，所述培養基中還包括IFN-γ和CD3單抗。

進一步地，步驟(2)的方法包括37℃，5％CO₂培養箱內培養7d，定期更換1/2對應培養液。

本發明還提供人參多糖在促CIK細胞增殖分化中的應用。

本發明還提供了利用所述制備方法制得的CIK細胞在制備腫瘤治療藥物中的應用。

以上所述人參多糖采用經水提醇沉法從人參中提取得到。

更進一步的，本發明還提供了一種水提醇沉法提取人參多糖的方法，包括以下步驟：