[發明專利]防治植物真菌病害的胡桃肉狀菌及其生產方法

在審

• 申請號: 201611094291.0
• 申請日: 2016-11-23
• 公開（公告）號: CN108085267A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 劉明明
• 申請（專利權）人: 劉明明
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01P3/00;C12R1/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及防治植物真菌病害的胡桃肉狀菌及其生產方法，屬于生物農藥技術領域。本發明采用的菌株是胡桃肉狀菌EBL?06菌株，分離自小麥葉面，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號：cGMccNo.2377。該菌株可以防治植物多種真菌病害，提高作物產量c本發明利用味精廢水來發酵胡桃肉狀菌，制備生防菌劑，該下藝生產的胡桃肉狀菌生防劑能有效防治多種植物真菌病害，并且生產成本低廉，操作簡單，還可以有效利用味精廢水，減少環境污染。

技術領域

本發明屬于生物農藥技術領域。

背景技術

根據味精生產過程中廢水所含污染物情況可分成三類：一是高濃度高酸度有機廢水即離交尾液；二是其它中高濃度有機廢水；三是不需處理直接外排的冷卻降溫水。離交尾液是通過離子交換法提取谷氨酸后剩余的“廢液”，它既含有豐富的有機質，還含有N、P、K等少量無機敖及其它微量元素，這些物質都可為生物生長提供營養。其它中高濃度有機廢水包括：淀粉廢水、制糖廢水、發酵洗灌廢水、精制廢水等。淀粉廢水和制糖廢水除了含有一定的有機污染物質外，還有一些懸浮物質；發酵洗灌廢水與離交尾液所含成分基本相同，只是含量較低；精制廢水有時呈酸性，有時呈堿性，有機物污染物質含量較高，這些有機廢也是微生物資源開發比較理想的營養來源之一。但是，這些廢水如果得不到合理利用，不僅會對環境造成嚴重污染，而且使資源白白浪費掉。目前，眾多味精廢水處理技術大致分為兩步，一是提取廢水中的谷氨酸菌體單細胞蛋白，通過此步分離菌體，常用物化方法進行處理(如絮凝、離心等方法)；二是提取菌體后廢液的處理，使其達到排放標準或處理后用于工廠回用，這也是眾多味精廢水處理技術所面臨的關鍵問題，常采用生物處理方法(如厭氧發酵、生物膜法，SBR法等)。

多粘類芽飽桿菌在自然界中分布廣泛，是一種重要的生防菌，對多種植物真菌、細菌病害均有較好的防治作用。多粘類芽抱桿菌對動植物真菌、細菌病原物具有廣譜抗性，利用大孔吸附樹脂對多粘類抱桿菌產生的抗真菌活性物質的吸附、解吸性能，篩選出其最佳解吸劑，該活性物質對熱、紫外線穩定，對胰蛋白酶、蛋白酶K有一定的耐受性，對氯仿部分敏感，對酸穩定，對堿敏感。可以作為微生物肥料菌劑中的一種成分分解秸稈，有效解決農業生產中一方面農業垃圾過多，污染水體和環境，處理困難，另一方面化肥，農藥使用過多，土壤惡化的矛盾。

發明內容

本發明的日的是提供一種能夠在植物葉際與根際定植，并且對多種病原菌具有拈抗作用的生防菌一多粘類芽抱桿菌EBL-06菌株，同時提供一種利用味精廢水生產該生防菌劑的方法。本發明所提供的生防菌株是由我們實驗室從小麥的葉面上分離篩選出來的。將其編號為EBL-06，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為二零零八年二月二十六日，分類命名為多粘類芽抱桿菌。保藏編號為：cGMcc NO.2377。該菌株具有下列性質：1菌落形態特征該菌株在PDA培養基上生長良好，單個菌落呈半玻璃珠狀，邊緣整齊，表面粘稠，與培養基結合緊密，菌落中心乳黃色。2菌體形態特征菌體桿狀，革蘭氏染色顯陽性，芽抱端生，包囊膨大。3碳源利用能力可以利用碳源：Q-環式糊精；肝糖；D-葡糖胺酸；衣康酸；D-半乳糖酸Y-內醋；D-半乳糖醛酸；2-環式糊精；肝糖；D-葡糖胺酸；衣康酸；D-半乳糖酸Y-內醋；D-半乳糖醛酸；2-輕基苯甲酸；4-輕基苯甲酸；L-精氨酸；L-天門冬酞胺；L-絲氨酸；甘氨酞-L-谷氨酸；D-木糖；D-甘露醇；苯乙胺。不可利用碳源：丙酮酸甲酷；D-纖維二糖；p-甲基-D-葡萄糖昔；i-赤醉糖醇；N-乙酞-D葡萄糖氨；D，L-u-磷酸甘油；u-丁酮酸；Y-經丁酸；L-苯丙氨酸；L-蘇氨酸；腐胺。對真菌拈抗能力菌株在PDA固體培養基上表現出對灰葡萄抱霉、黃瓜黑星病的病原菌原菌、木霉菌等的高效拈抗效果。5[0 021 J 2、液體種子制備：向高壓滅菌的土顯液體培養基中，接種多粘類芽抱桿菌，25-35攝氏度培養，得到液體種子。4、液態發酵：向經過預處理的廢水中接種5％(體積)的液體種子，于25-35℃，通無菌空氣培養24-72小時。[0。2315、后處理：培養好的發酵液經細菌計數后，包裝使用。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明：

由本發明技術方案生產的多粘類芽抱桿菌生防劑能夠高效防治多種真菌類植物病害，而且無公害，生產成本低，并且有效地利用了味精廢水。以下通過具體實施例詳細說明本發明的實施，目的在于幫助讀者更好地理解本發明的精神實質，但不作為對本發明實施范圍的限定。[0。25]實施例1：多粘類芽抱桿菌生物農藥制備種子培養基制備：稱取200g土豆，切碎，于兒自來水中煮沸30分鐘，過濾除去殘渣，加入20g葡萄糖，定容至IL，即得土豆培養基。分裝入5個1L的三角瓶中，滅菌20min。[0。27]發酵培養基制備：經過絮凝除去細菌蛋白的味精廢水比加入10L自來水稀釋，并用氫氧化鈉調節pH至6.0。[0。25]液體種子制備：向土豆液體培養基中接種多粘類芽抱桿菌，于30℃，搖瓶，恒溫搖床振蕩培養24小時，得到液體種子。[0。29J發酵產品：將上述發酵培養基裝罐到10L的發酵罐中，121℃滅菌10min，按照5％的接種量接種液體種子，在30℃恒溫，通無菌空氣的條件下，發酵2至3天，取樣計數后，無菌條件下分裝。