[發明專利]重組脊髓灰質炎III型病毒樣顆粒

在審

• 申請號: 201611087086.1
• 申請日: 2016-12-01
• 公開（公告）號: CN108130332A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 仝鑫;孟凡舉;于桂梅;崔盟
• 申請（專利權）人: 上海澤潤生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/43
• 分類號: C12N15/43;C12N15/81;C12N1/19;C12N7/04;C07K14/105;C12R1/84
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本發明公開了一類密碼子優化的編碼III型野生型脊髓灰質炎病毒外殼前體蛋白的基因以及編碼I型減毒脊髓灰質炎病毒3CD蛋白的基因，前述基因在被轉入酵母細胞后利用共表達可高效地胞內自發組裝成VLP顆粒。本發明還公開了一種具有免疫原性的大分子，其主要由前述基因在酵母細胞中表達產生。本發明還公開了前述具有免疫原性的大分子的應用和組合物。

技術領域

本發明涉一種新的畢赤酵母表達系統，其可用于生產脊髓灰質炎病毒III型病毒樣顆粒。

背景技術

脊髓灰質炎是一種急性傳染病，由脊髓灰質炎病毒引起，主要通過消化道傳播。病毒常侵犯中樞神經系統，損害脊髓前角運動神經細胞，導致肢體松弛性麻痹，多見于兒童，又名小兒麻痹癥。部分小孩得病后可以自行痊愈，但多數小孩患病后會出現下肢肌肉萎縮、畸形，結果引起終身殘疾，多為跛行甚至根本不能站立、行走。目前針對這種疾病尚無有效的治療方法，只能通過疫苗預防。

截止到2005年，全球范圍內仍有6個國家存在脊灰野病毒的流行，其中與中國接壤的有3個，印度尼西亞、也門等一些已經消滅脊灰的國家相繼發生了輸入性脊灰野病毒傳播，造成局部地區脊灰重新暴發流行。自2004年以來此類輸入事件已在全球18個無脊灰國家重演。一旦條件適宜，脊灰野病毒仍可能卷土重來。2000年10月，世界衛生組織西太平洋地區宣布成為無脊髓灰質炎區域，標志著中國已達到無脊髓灰質炎目標。但這三個存在野毒株的鄰國對中國構成輸入性威脅，使我國的維持無脊灰工作面臨嚴峻挑戰。

口服脊髓灰質炎減毒活疫苗(oral polio vaccine，OPV)在1958年研制成功在美國上市，后來推廣至全球。OPV的接種簡單(口服)、費用低、可產生穩定的腸道粘膜免疫、有效阻斷脊灰病毒傳播等。OPV的推廣使脊髓灰質炎疫情得到了有效的控制，全球的小兒麻痹癥發病率逐年下降。但每服用250萬劑-1000萬劑OPV，可能發生1例疫苗相關病例，包括疫苗相關麻痹型脊灰(Vaccine associated paralytic poliomyelitis，VAPP)病例，疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived poliovirus，VDPV)及其所引起的疫苗衍生脊灰病毒的循環(Circulating vaccine-derived polioviruses，cVDPVs)和免疫缺陷疫苗衍生脊灰病毒(Immunodeficient related vaccine-derived poliovirus，iVDPV)病例。

IPV是通過用甲醛滅活的脊灰毒株生產的傳統滅活疫苗(Conventionalinactivated poliovirus vaccine，cIPV)。國外研發的IPV使用野毒株滅活，其免疫原性和安全性都很理想，能有效預防脊灰爆發，并且IPV不存在引起VAPP、cVDPVs等風險，其群體免疫優于OPV。但是對技術及生產要求較高，價格昂貴。2015年我國上市的自主研發的IPV使用減毒株滅活，也同樣具有很好的免疫原性及安全性。隨著全世界消滅脊灰目標的推進，將會更加嚴格管理脊灰毒株，包括弱毒株及野毒株。所以新一代脊髓灰質炎疫苗的開發迫在眉睫。

脊髓灰質炎病毒屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)腸道病毒屬(Enteroviruse)，直徑20～30nm，立體對稱12面體。病毒顆粒中心為單股正鏈RNA，核衣殼體裸露無囊膜。脊髓灰質炎病毒基因組RNA長約7.5kb。基因組分為5′端非編碼區、多聚蛋白編碼區、3′端非編碼區和3′端Poly(A)尾四部分。其中多聚蛋白編碼區編碼產生一個多聚蛋白前體，分為P1、P2和P3區；P1區可經蛋白酶水解產生衣殼蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，P2和P3區則可水解產生蛋白酶、RNA復制酶及用于識別細胞、調節基因的其他蛋白。核衣殼含4種結構蛋白VP1、VP3和由VP0分裂而成的VP2和VP4。VP1為主要的外露蛋白至少合2個表位(epitope)，可誘導中和抗體的產生，VP1對人體細胞膜上受體有特殊親和力，與病毒的致病性和毒性有關。VP0分裂為VP2與VP4，為內在蛋白與RNA密切結合。VP2與VP3半暴露具抗原性。5個拷貝的VP1、VP2、VP3和VP4構成了五聚體，12個五聚體構成二十面體核殼。