[發(fā)明專利]一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611083102.X
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106717843B
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙翠榮;劉瑩;盧陽;王立峰;唐清;陳科海;彭萍
• 申請（專利權(quán)）人: 襄陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01G22/22
• 分類號: A01G22/22;A01G31/00;A01H4/00
• 代理公司: 西安億諾專利代理有限公司 61220
• 代理人: 熊雁

1.一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

（1）當(dāng)小麥單倍體胚生試管苗長至2-3片葉、有根時，轉(zhuǎn)入溫度、光照強(qiáng)度、光照時長可設(shè)定的壯苗用培養(yǎng)箱進(jìn)行壯苗預(yù)培養(yǎng)；

（2）壯苗用培養(yǎng)箱中50%的試管苗達(dá)到三葉期時，將此試管苗轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)瓶灼燒后封口，置于壯苗用培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行壯苗培養(yǎng)；

（3）壯苗培養(yǎng)2-3周后，向培養(yǎng)瓶中無菌添加1號營養(yǎng)補(bǔ)給液，培養(yǎng)瓶灼燒后封口，置于壯苗用培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，以后每隔2周向培養(yǎng)瓶內(nèi)添加與1號營養(yǎng)補(bǔ)給液體積相同的2號營養(yǎng)補(bǔ)給液；

（4）試管苗產(chǎn)生2-3個分蘗時，轉(zhuǎn)入溫度、光照強(qiáng)度、光照時長可調(diào)節(jié)的越夏用培養(yǎng)箱進(jìn)行越夏培養(yǎng)，每2周向培養(yǎng)瓶內(nèi)無菌添加2號營養(yǎng)補(bǔ)給液；

（5）10月下旬到11月上旬，將試管苗的培養(yǎng)箱培養(yǎng)條件恢復(fù)至壯苗用培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件，并準(zhǔn)備試管苗移栽用地；

（6）移栽用地準(zhǔn)備好后，田間氣溫降至15℃以下時，試管苗進(jìn)行移栽前煉苗，每天向培養(yǎng)瓶內(nèi)無菌添加2次2號營養(yǎng)補(bǔ)給液；

（7）煉苗2-3天后，以2號營養(yǎng)補(bǔ)給液做為移栽定根水，進(jìn)行試管苗的露地移栽；

其中，1號營養(yǎng)補(bǔ)給液的配置方法為：將硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀用水溶解，加入用95%乙醇溶解的多效唑，其中，硝酸銨 1650 mg/L、硝酸鉀1900 mg/L、磷酸二氫鉀 170 mg/L、多效唑0.5 mg/L，調(diào)節(jié)pH值至5.6-5.8，滅菌，4℃下保存期限為2周；

2號營養(yǎng)補(bǔ)給液的配置方法為：將硝酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀用水溶解，其中，硝酸銨1650 mg/L、硝酸鉀1900 mg/L、磷酸二氫鉀 170 mg/L，調(diào)節(jié)pH值至5.6-5.8，滅菌，4℃下保存期限為2周；

壯苗培養(yǎng)基的配方為MS大量元素、MS微量元素、MS鐵鹽、MS有機(jī)物質(zhì)、多效唑0.5 mg/L、蔗糖30g/L，瓊脂6.5 g/L，pH值5.6-5.8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：壯苗用培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件為：13-14℃、11h光照和13h黑暗，其中11h的光照強(qiáng)度為2000-3000lx。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟（3）中1號營養(yǎng)補(bǔ)給液的加入的體積為步驟（2）壯苗培養(yǎng)基體積的0.25倍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：越夏用培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件為：4-7℃、10h光照和14h黑暗，其中10h的光照強(qiáng)度為2000-3000lx。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟（4）中2號營養(yǎng)補(bǔ)給液加入的體積與步驟（3）相同。

6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟（6）中移栽前煉苗的具體操作為：將培養(yǎng)瓶移到培養(yǎng)架上，在20℃、12h光照度為5000-10000lx的光照和12h黑暗的條件下，敞開培養(yǎng)瓶的瓶口進(jìn)行移栽前煉苗，同時在培養(yǎng)架隔板間噴霧以增加瓶口周圍濕度。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟（6）中2號營養(yǎng)補(bǔ)給液的加入量為步驟（4）中2號營養(yǎng)補(bǔ)給液加入量的20%，每天向培養(yǎng)瓶內(nèi)無菌添加2次2號營養(yǎng)補(bǔ)給液的時間分別為上午9時和下午17時。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小麥單倍體胚生試管苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：無菌添加1號營養(yǎng)補(bǔ)給液或2號營養(yǎng)補(bǔ)給液的具體操作為：在無菌條件下，將培養(yǎng)瓶的瓶口敞開，用無菌移液管轉(zhuǎn)移1號或2號營養(yǎng)補(bǔ)給液至培養(yǎng)瓶內(nèi)，灼燒瓶口，然后封口。