[發(fā)明專利]生物標志物在鑒定檢疫性實蠅有效冷處理中的應用及鑒定方法

有效

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• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106841412B
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發(fā)明（設計）人: 任荔荔;劉波;魯敏;詹國平;王躍進;周烔;段勝亮
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06
• 代理公司: 11212 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權代理有限公司
• 代理人: 楊立

本發(fā)明涉及生物標志物在鑒定檢疫性實蠅有效冷處理中的應用，還涉及一種鑒定檢疫性實蠅有效冷處理的方法，其特征在于，包括以下步驟：S1：從待檢疫的檢疫性實蠅樣品提取總代謝物，檢測所述總代謝物中生物標志物的含量；S2：將所述待檢疫的檢疫性實蠅樣品的總代謝物中的生物標志物的含量與對照數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學比較，如果比較結(jié)果為差異顯著，并且所述生物標志物含量滿足閾值時，則判定所述待檢疫的檢疫性實蠅進行了有效冷處理。本發(fā)明使用生物標志物對檢疫性實蠅幼蟲進行快速、高通量篩查，靈敏度和準確度高，縮短了檢疫處理觀察期判別的時間，大大降低了檢疫處理實驗驗證的成本。

技術領域

本發(fā)明涉及檢驗檢疫領域，更特別地，生物標志物在鑒定檢疫性實蠅有效冷處理中的應用及鑒定方法。

背景技術

隨著全球經(jīng)濟一體化進程的深入，國際貿(mào)易日趨頻繁和多樣化，導致外來有害生物入侵頻率加大，對生態(tài)環(huán)境和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)構成巨大的潛在威脅。中國是水果進出口大國，如何有效防范有害生物的跨境傳播，確保我國農(nóng)業(yè)、林業(yè)及生態(tài)安全，提高我國出口水果產(chǎn)品質(zhì)量，已經(jīng)成為我國出入境檢疫部門關注的重點之一。

水果能夠傳帶多種危險性外來有害生物，特別是地中海實蠅、番石榴實蠅、木瓜實蠅等水果產(chǎn)業(yè)的毀滅性檢疫有害生物，寄主范圍極廣，幾乎包含所有經(jīng)濟類水果，繁殖力和適應性強，其卵、幼蟲、蛹都可隨寄主類果實、包裝物及運輸工具進行遠距離傳播。一旦傳入就有暴發(fā)成災的可能，其結(jié)果不僅釀成重大經(jīng)濟損失，而且對新侵入地區(qū)的果蔬種植業(yè)構成嚴重威脅。為了防止外來生物入侵并滿足口岸快速通關的需要，一般的做法只能在入境口岸實施溴甲烷熏蒸處理。但溴甲烷作為臭氧層消耗物質(zhì)，雖然檢疫用途的溴甲烷消費屬于《蒙特利爾議定書》的豁免范圍，但是近年來，國際社會要求包括檢疫中使用的溴甲烷都應加速淘汰的呼聲越來越高，歐盟已于2010年全面禁止了所有用途的溴甲烷使用。目前較為廣泛的檢疫處理方法為冷處理。

然而，有些攜帶有害生物的水果不經(jīng)冷處理，就試圖進入我國市場。還有些進行過冷處理后，幼蟲不會立刻死亡，甚至有些幼蟲會通過滯育度過脅迫階段。目前對于昆蟲是否進行檢疫處理鑒定的技術還處于空白階段，主要還局限在實驗室飼養(yǎng)觀察的方法，須經(jīng)實驗室培養(yǎng)后才能判讀是否進行過冷處理，或者判斷處理是否有效，但這么做耗時較長(一般需一周以上)，影響入境貨物的通關速度。所以，快速判別幼蟲是否進行冷處理，較好地防范了外來有害生物的入侵，對保障我國生物安全有重要的理論意義和實用價值。因此，需要一種快速可靠的方法來鑒定待檢疫的貨物是否進行過有效的冷處理。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明基于代謝組學技術，依靠現(xiàn)代化學計量學和計算機模型系統(tǒng)，處理分析不同處理的昆蟲體內(nèi)的代謝物質(zhì)，提取出有用的特征，從而達到靈敏、準確、高效識別昆蟲幼蟲處理有效性的目的，為檢驗檢疫決策做出有力的技術支持。

基于此，本發(fā)明提供了生物標志物在鑒定檢疫性實蠅有效冷處理中的應用。

優(yōu)選地，所述生物標志物為α-羥基戊二酸或焦棓酸。

本發(fā)明還提供了一種鑒定檢疫性實蠅有效冷處理的方法，其包括以下步驟：

S1：從待檢疫的檢疫性實蠅樣品提取總代謝物，檢測所述總代謝物中生物標志物的含量；

S2：將所述待檢疫的檢疫性實蠅樣品的總代謝物中的生物標志物的含量與對照數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學比較，如果比較結(jié)果為差異顯著，并且所述生物標志物含量滿足閾值時，則判定所述待檢疫的檢疫性實蠅進行了有效冷處理。

進一步地，所述生物標志物的含量通過GC/MS檢測得到。

進一步地，S1包括以下步驟：

S1.1：提取總代謝物，得到總代謝物提取液；

S1.2：向所述總代謝物提取液中添加內(nèi)標；

S1.3：吹干，加入甲基化試劑進行甲基化；