[發明專利]一種解磷菌PC05及其分離篩選方法

有效

• 申請號: 201611081455.6
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106754487B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 肖乃東;李震宇;朱端衛;周洋;周文兵;蔡建波;肖雪;楊特武
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/6869;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

本發明公開了一種解磷菌PC05及其分離篩選方法，所述解磷菌PC05菌株名稱為Inquilinus ginsengisoli PC05，已于2016年6月24日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M2016347，地址：中國，武漢，武漢大學。本發明培養制得的一種解磷菌PC05可以豐富野生解磷菌遺傳資源，具有較高的解磷能力,增加土壤中有效磷的含量，提高土壤中難溶性磷的利用效率，減少磷肥施用量。

技術領域

本發明涉及一種農業微生物技術領域，具體涉及一種解磷菌PC05及其分離篩選方法。

背景技術

磷在植物體中的含量僅次于氮和鉀，是植物生長發育的關鍵營養元素之一。缺磷土壤一般是指土壤有效磷(P)小于10mg/kg的土壤，我國缺磷土壤面積超過耕地總面積的74％，土壤中的磷絕大部分以難溶性磷酸鹽形式存在，植物無法直接吸收利用。為滿足生產需要，我國絕大部分的耕種田都要大量補充磷化肥，由于長期的累積和富集，造成了土壤板結、營養元素失衡等一系列生產、生態問題，故如何改善和提高我國耕作田土壤磷的利用率，仍然是一項戰略性課題。從已有的文獻報道來看，解磷菌種類繁多復雜，解磷能力也參差不齊，并且應用于實際生產的菌種種類少，缺乏創新，從這個角度看，篩選具有較強解磷能力野生菌株的工作仍然具有重大意義。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種解磷菌PC05及其分離篩選方法，可以豐富野生解磷菌遺傳資源，獲取具有較強解磷能力的解磷菌株。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為：一種解磷菌PC05，所述解磷菌PC05菌株名稱為Inquilinusginsengisoli PC05，已于2016年6月24日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M2016347，地址：中國，武漢，武漢大學。

一種如權利要求1所述的解磷菌PC05的分離篩選方法，包括如下步驟：

(1)無機磷固體培養基的制備：按重量份數計，培養基由下述成分組成：葡萄糖10g、(NH₄)₂SO₄ 0.5g、MgSO₄·H₂O 0.3g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、FeSO₄·7H₂O 0.03g、MnSO₄·H₂O 0.03g、Ca₃(PO₄)₂ 5g、瓊脂20g、蒸餾水1000g；將Ca₃(PO₄)₂與其余成分分開滅菌后混合，調節pH為7.0～7.2；

(2)取10mL豬泡糞液樣品，放入帶有玻璃珠的試劑瓶中，加入90mL無菌水，在28～30℃恒溫振蕩30～45min，使樣品均勻分散于無菌水中，得到稀釋倍數為10^-1的菌懸液，將菌懸液靜置后取上清液，依次稀釋得到10^-3、10^-5、10^-7倍濃度梯度的樣品菌懸液，10^-3、10^-5、10^-7倍濃度梯度的菌懸液各取0.1mL，依次均勻的涂布在無機磷固體培養基上，放入恒溫培養箱中，在30℃條件下恒溫培養3～5天后，觀察并記錄菌落及溶磷圈的大小，做好菌種標記，篩選出6株解磷菌PC01、PC02、PC03、PC04、PC05、PC06，比較6株解磷菌在無機磷固體培養基上的溶磷圈直徑(HD)與菌落直徑(CD)的比值，篩選出HD/CD值最大的菌株即為解磷菌PC05。

如上述所述的解磷菌PC05的鑒定方法為：利用引物27F和1492R對菌株PC05進行擴增和正向測序，得到序列長度為1445bp，通過BLAST將序列與GenBank數據庫中序列進行對比，其與NR_112560.1相似性超過99％，鑒定其為Inquilinus ginsengisoli。