[發明專利]利用魚類下腳料和固定化酶制備緩釋性海參餌料的方法

有效

• 申請號: 201611081141.6
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN106616015B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 孫永軍;毛旭華;鞠文明;唐曉波;胡煒
• 申請（專利權）人: 山東好當家海洋發展股份有限公司
• 主分類號: C12N11/04
• 分類號: C12N11/04;C12N11/10;A23K50/80;A23K10/26;A23K10/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了利用魚類下腳料和固定化酶制備緩釋性海參餌料的方法。其解決現有魚類下腳料直接投喂海參無法消化利用的問題。其是在培養基中接種魚腸道中分離篩選得到的產蛋白酶菌株，培養出種子菌液；將魚類下腳料肉糜放入種子菌液中發酵，形成發酵液；將殼聚糖溶液注射到氫氧化鈉和甲醇混合溶液中，凝結成中空球形殼聚糖載體；載體放入戊二醛水溶液中活化；將酶包裹在空心球殼聚糖載體中，形成固定化酶；再將固定化酶與發酵液投放到海參養殖水域。本發明的方法工藝合理，操作可行。其固定化酶的穩定性高，半衰周期長，對魚類下腳料發酵液緩慢酶解，釋放海參餌料，同時對沉積的殘餌起到降解作用，減少了投餌次數，降低人工成本。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其是一種利用魚類下腳料和固定化酶制備緩釋性海參餌料的方法。

背景技術

我們知道，海參具有很高的營養價值和藥用價值，被人們視為重要的海珍品。近年來，海參消費需求量的逐年增加導致了海參自然資源的過度開發和種群數量的急劇下降，因此，海參的人工養殖也隨之發展起來。餌料是海參生長發育的物質基礎，隨著海參大規模養殖的發展，天然餌料已不能滿足海參養殖的需要，因此需要人工投喂餌料。目前，人工投喂餌料存在著人工成本高、投放的餌料利用率低、人工投放餌料的量和時間不易掌握等問題。

魚類是我國沿海豐富的海產資源，魚類加工后的下腳料（魚碎肉和內臟）成本低、蛋白質、牛磺酸含量高，是海參理想的天然餌料，但是使用未加工的魚下腳料，又存在海參無法消化利用的缺點。

發明內容

為了克服現有技術中魚類下腳料直接投喂海參無法消化利用的不足，本發明提供一種工藝合理、海參餌料的腸道利用率高的利用魚類下腳料和固定化酶制備緩釋性海參餌料的方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案為：利用魚類下腳料和固定化酶制備緩釋性海參餌料的方法，其特征在于：其經過下列工藝步驟：

（a）魚類下腳料發酵處理

（a1）發酵種子菌液的培養

在DAE培養基中接入W2菌種，控制溫度20～25℃，在150～180r/min條件下，培養2～3d，得種子菌液，所述的種子菌液OD600為1.0～1.2；其中，所述的DAE培養基的配方為：蛋白胨0.4～0.8g，酵母膏0.05～0.2g，磷酸鐵0.01～0.02g，海水90～100ml；所述的W2菌種為魚腸道中分離篩選得到的產蛋白酶菌株，該W2菌種與所述的DAE培養基的接種比例為1:300～500；

（a2）魚類下腳料發酵液的制備

選取魚下腳料為原料，研磨至肉糜狀；稱量肉糜狀魚類下腳料放入步驟(a1)制得的種子菌液中，控制溫度20～25℃，在150～180r/min條件下，培養2～3d，取發酵液，得魚類下腳料發酵液；其中，所述的肉糜狀魚類下腳料與種子菌液的料液比為1:20～25；

（b）固定化酶的制備

（b1）載體制備

稱取殼聚糖溶解于濃度為20～30%的鹽酸溶液中，配成殼聚糖溶液；然后將制得的殼聚糖溶液注射到含15%的氫氧化鈉和30%甲醇混合溶液中，凝結成中空球形殼聚糖；其中，所述的殼聚糖與鹽酸溶液的料液比為1:3～5，所述的殼聚糖的脫乙酰度為80%～85%；

（b2）載體活化

將步驟（b1）制得的中空球形殼聚糖放入濃度為4～8%的戊二醛水溶液中，于室溫下攪拌反應4～6h，然后4℃靜置過夜，去上清液后用水清洗2～3次，去除殘余的戊二醛，得戊二醛活化處理的中空球形殼聚糖；其中，所述的中空球形殼聚糖與戊二醛水溶液的料液比為1:2～3；

（b3）酶的包埋