[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)寨卡病毒、登革熱病毒和基孔肯雅病毒的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611080920.4
• 申請(qǐng)日: 2016-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN106755571B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張巖;蓋偉;單萬(wàn)水;邢婉麗;宋翠丹;馬桂紅;劉厚明;程京
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博奧生物集團(tuán)有限公司;深圳市第三人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;何葉喧

本發(fā)明公開了一種用于檢測(cè)寨卡病毒、登革熱病毒和基孔肯雅病毒的試劑盒。本發(fā)明保護(hù)引物探針組合，由引物探針組Ⅰ、引物探針組Ⅱ和引物探針組Ⅲ組成；引物探針組Ⅰ由引物ZIKV?F、引物ZIKV?R和探針ZIKV?P組成；引物探針組Ⅱ由引物DENV?F、引物DENV?R1、引物DENV?R2和探針DENV?P組成；引物探針組Ⅲ由引物CHIKV?F、引物CHIKV?R和探針CHIKV?P組成；引物ZIKV?F、引物ZIKV?R、探針ZIKV?P、引物DENV?F、引物DENV?R1、引物DENV?R2、探針DENV?P、引物CHIKV?F、引物CHIKV?R、探針CHIKV?P依次如序列1至10所示。本發(fā)明對(duì)于寨卡病毒、登革熱病毒和基孔肯雅熱病毒的檢測(cè)和相關(guān)疾病的防控具有重大價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)寨卡病毒、登革熱病毒和基孔肯雅病毒的試劑盒。

背景技術(shù)

蚊媒病毒在全世界分布廣泛，是一種重要的傳染病病原，主要通過(guò)蚊蟲叮咬傳播，傳播速度快，易對(duì)人類和社會(huì)造成嚴(yán)重危害，特別是近年來(lái)，不斷爆發(fā)蚊媒病毒疫情。蚊媒病毒大多屬于黃熱病毒科黃熱病毒屬，主要有黃熱病毒、登革熱病毒以及寨卡病毒，還有少數(shù)為膜病毒科甲病毒屬，例如基孔肯雅病毒，這些病毒都屬于蚊媒傳播病毒，且近年來(lái)，不斷有疫情爆發(fā)。2015年-2016年在巴西爆發(fā)寨卡病毒疫情，迅速蔓延至30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，同時(shí)在歐洲、北美等地的多個(gè)國(guó)家均報(bào)告發(fā)現(xiàn)輸入性病例，我國(guó)今年也報(bào)告了多例輸入性病例，由于寨卡病毒可能導(dǎo)致胎兒小頭畸形、引起格林-巴利綜合征而受到廣泛關(guān)注。近年來(lái)，引起過(guò)大規(guī)模傳染病爆發(fā)的蚊媒病毒還有登革熱病毒和基孔肯雅病毒，世界衛(wèi)生組織每年都收到大約50萬(wàn)份登革熱病例的報(bào)告。

目前，我國(guó)已有研究機(jī)構(gòu)研制出基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR探針?lè)ǖ恼ú《緳z測(cè)方法、登革熱病毒檢測(cè)方法和基孔肯雅病毒檢測(cè)方法，但這些方法均為單指標(biāo)的病毒檢測(cè)方法。如果需要同時(shí)篩查相關(guān)的蚊媒病毒，需要用到多種試劑盒，樣品消耗量大，操作復(fù)雜，成本高昂。

目前基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR探針?lè)ǖ暮怂釞z測(cè)試劑，由于試劑中的DNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶必須保存于-20℃條件下，因此，這類核酸檢測(cè)試劑均需使用干冰，以保證冷鏈運(yùn)輸和低溫儲(chǔ)存，保證試劑盒不失效。但由于蚊媒相關(guān)病毒，如寨卡病毒、登革熱病毒、基孔肯雅病毒等的多發(fā)地集中于非洲、南美和東南亞等熱帶地區(qū)，受當(dāng)?shù)貧夂驐l件及經(jīng)濟(jì)狀況的限制，絕大多數(shù)地方要實(shí)現(xiàn)試劑的冷鏈運(yùn)輸非常困難，使得這些核酸檢測(cè)試劑在這些地區(qū)的應(yīng)用受到很大的限制。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測(cè)寨卡病毒、登革熱病毒和基孔肯雅病毒的試劑盒。

本發(fā)明首先保護(hù)引物探針組合(引物探針組合甲)，由引物探針組Ⅰ、引物探針組Ⅱ和引物探針組Ⅲ組成；

所述引物探針組Ⅰ由引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探針ZIKV-P組成；

所述引物ZIKV-F為如下(b1)或(b2)；

(b1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(b2)將序列1經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物ZIKV-R為如下(b3)或(b4)；

(b3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(b4)將序列2經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探針ZIKV-P的核苷酸序列為如下(b5)或(b6)；

(b5)如序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

(b6)將序列3經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子；