[發(fā)明專(zhuān)利]一種出芽短梗霉聚酮合成酶基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611080406.0
• 申請(qǐng)日: 2016-11-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106701800B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉飛;張金華;王鳳山;朱希強(qiáng);于林艷;張林軍;袁超;張祥奎;侯重文;凌沛學(xué)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東大學(xué);山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/53
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/53;C12N9/04;C12N15/81;C12N1/19;C12P17/10;C12R1/84
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221
• 代理人: 王志坤

1. 一種出芽短梗霉聚酮合成酶基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2. 由權(quán)利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因編碼的聚酮合成酶，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.含有權(quán)利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因的重組表達(dá)載體。

4.如權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體為將權(quán)利要求1的出芽短梗霉聚酮合成酶基因插入到pGAPZα-A表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)得到重組質(zhì)粒。

5.含有權(quán)利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因的表達(dá)盒。

6.含有權(quán)利要求3或4所述的重組表達(dá)載體的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

7.如權(quán)利要求6所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌是將權(quán)利要求3或4所述的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化畢赤酵母SMD1168H得到的重組菌。

8.權(quán)利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因和/或權(quán)利要求2所述的聚酮合成酶在黑色素體外合成中的應(yīng)用。

9.一種黑色素體外合成的方法，包括如下步驟：發(fā)酵培養(yǎng)權(quán)利要求6所述重組菌，收集發(fā)酵上清液，沉淀上清液中的蛋白質(zhì)，再對(duì)蛋白沉淀進(jìn)行脫鹽和濃縮，即得聚酮合成酶粗酶液；將聚酮合成酶粗酶液與出芽短梗霉粗酶液、丙二酰輔酶A混合，調(diào)節(jié)pH至8.0，38~40℃條件下反應(yīng)，反應(yīng)期間進(jìn)行充分供氧，反應(yīng)40~60分鐘；反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)pH至2.0~3.0，離心，收集沉淀，得到黑色素粗產(chǎn)物。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述出芽短梗霉粗酶液為出芽短梗霉新鮮菌體經(jīng)液氮研磨破壁，用磷酸鈉緩沖液重溶菌粉，離心，獲得的上清液。

11.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，還包括：將黑色素粗產(chǎn)物進(jìn)行純化的步驟，具體如下：將黑色素粗產(chǎn)物溶于NaOH中，加入酸性甲醇，靜置，離心，收集沉淀，將沉淀用蒸餾水洗滌至中性，烘干，即得黑色素。