[發(fā)明專利]一種環(huán)己酮單加氧酶及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611077847.5
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN108118035B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金志平;金圣芳;鄭飛;張敏潔;黃悅
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江京新藥業(yè)股份有限公司;上海京新生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/16
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 賈師英

1.一種將奧美拉唑硫醚催化轉(zhuǎn)化成埃索美拉唑的環(huán)己酮單加氧酶，其特征在于，所述環(huán)己酮單加氧酶的氨基酸序列選自：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17。

2.編碼根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)己酮單加氧酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列選自：編碼氨基酸序列SEQ ID NO:3的SEQ ID NO:4；編碼氨基酸序列SEQ ID NO:5的SEQ ID NO:6；編碼氨基酸序列SEQ ID NO:7的SEQ ID NO:8；編碼氨基酸序列SEQ ID NO:9的SEQ ID NO:10；編碼氨基酸序列SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:12；編碼氨基酸序列SEQ IDNO:13的SEQ ID NO:14；編碼氨基酸序列SEQ ID NO:15的SEQ ID NO:16；編碼氨基酸序列SEQ ID NO:17的SEQ ID NO:18。

3.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體攜帶根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因。

4.一種基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株攜帶根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株為重組大腸桿菌基因工程菌株。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因工程菌株，其特征在于，所述重組大腸桿菌基因工程菌株采用以下方法構(gòu)建：以根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因?yàn)槟０澹ㄟ^在該基因兩端加Nde I和BamH I內(nèi)切酶片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增擴(kuò)展，并利用Nde I和BamH I內(nèi)切酶位點(diǎn)將該基因插入至pET28a質(zhì)粒中，連接獲得攜帶該基因的表達(dá)載體，然后將該表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中，即構(gòu)建獲得攜帶所述基因的重組大腸桿菌基因工程菌株。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基因工程菌株，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增擴(kuò)展的引物如下：

正向引物F1：GGAATTCCATATGAGTACCAAGATGGATTTTGATGC；

反向引物R1：CGCGGATCCTTACGCATTAGCCTGCTGTTTGG。

8.一種將奧美拉唑硫醚催化轉(zhuǎn)化成埃索美拉唑的方法，其特征在于，向反應(yīng)體系中加入根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)己酮單加氧酶，或者攜帶根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)己酮單加氧酶的基因工程菌株，然后將奧美拉唑硫醚底物催化轉(zhuǎn)化成埃索美拉唑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述奧美拉唑硫醚底物的濃度高達(dá)165g/L。